SRAP和SSR标记构建的甘蓝型油菜品种指纹图谱比较.pdfVIP

2006年 9月 2006，28(3)：233—239 中国油料作物学报 Chinese jotlrnal of oil crop sciences SRAP和 SSR标记构建的 甘蓝型油菜品种指纹图谱比较 文雁成 ，王汉中¨，沈金雄 ，刘贵华 (1．中国农业科学院油料作物研究所，湖北 武￡t 430062；2．河南省农业科学院棉花油料作物研究所 ，河南 郑州 450002) 摘要：利用 SRAP(sequence—related amplified polymorphism)和 SSR标记构建了甘蓝型油菜品种指纹图谱 ，并对 两种标记方法进行了比较。结果表明：(1)每对 SRAP引物扩增出20．36个条带，其中4．44个是清晰、易于辩认的 多态性带；每对 SSR弓I物扩增出 3．88个条带．均为多态性条带。(2)采用 25对 SRAP和 SSR引物分别构建 4O个 和 75个品种的特异指纹图谱，SRAP指纹中具有特异图谱的比例(82．5％和 50．7％)高于 SSR指纹图谱的结果 (60．0％和44．4％)。品种数越多具有特异指纹的品种越少。(3)运用引物组合法构建品种指纹图谱，大大地提高 了指纹图谱的特异性。25对 SSR引物组合扩增 97个多态性谱带 ，两个不 同的品种具有相同谱带的概率只有 6．3108×10一 。组合指纹图谱比组合数码图谱更直观。与 SRAP标记相比，SSR标记以其扩增谱带少 、易于识别 和统计而更适合用于引物组合法构建品种指纹图谱。 关键词：甘蓝型油菜；品种；指纹图谱；SRAP标记；SSR标记 中图分类号：$565．403 文献标志码：A 文章编号：1007-9084(2006)03—0233—07 用于油菜品种真实性鉴定的方法包括农艺性状 鉴定、同功酶、蛋白质电泳图谱鉴定和 DNA指纹图 谱鉴定?。其中农艺性状鉴定受季节和环境条件 的影响，可靠性较差，鉴定周期长。同功酶和蛋白质 是基因表达的产物，遗传多态性位点少，难以有效鉴 别遗传关系较密切的品种[2 3。DNA指纹技术不受 取材部位、取材时间和环境影响，大大地提高了鉴定 的精度，缩短鉴定时间，是一种最为科学有效的鉴定 品种真实性的方法。指纹图谱在作物品种鉴定、品 种注册、良种质量监测以及知识产权保护等方面具 有重要作用。 用来构建品种指纹图谱的 DNA分子标记方法 有 RFLP、RAPD、AFLP和 SSR等。其中 RFLP标记 需要高质量和足够数量的 DNA。RAPD标记受环境 影响较大，稳定性较差。AFLP标记操作复杂、成本 较高 。SSR标记作用于整个基因组，它对 DNA的 质量和数量要求不高，操作简单，多态性较好，成为 构建品种指纹图谱的常用手段。Sabhyata等 运用 SSR标记对印度芥菜型油菜进行了指纹图谱分析， 得到了芥菜型油菜的特异指纹图谱。刘平武等 和雷天刚等 分别运用 SSR标记构建 了双低甘蓝 型油菜杂交种亲本和黄籽品种的指纹图谱。SSR标 记也存在一定的局限性，它的引物开发较为费力费 时，可用的引物有限。Li等 开发出一种新的基于 PCR的分子标记技术 SRAP(sequence—related am- pli15ed polymorphilism)。SRAP标记引物设计和操作 简单，多态性好，它作用于外显子部分，与表型直接 相关，具备传统分子标记的优点。Li等 用该标记 对甘蓝进行 DNA扩增，获得的45％片段与 Genbank 数据库中的已知基因相同。用 SRAP标记构建的甘 蓝连锁图谱与 AFLP构建的连锁图谱无差别，用该 标记方法还成功地对甘蓝中硫代葡萄糖甙脱饱和基 因BoGLS—ALK进行了标记。Li等 还用该方法 对甘蓝与拟南芥的基因组进行了基因比对，发现在 190个多态性 cDNA条带中，有 169个序列是相似 的，二者在常染色质区的基因具有广泛的共线性关 系。Ahmad等 用 SSR和 SRAP标记对桃品种的 遗传多样性进行了分析，发现 SRAP标记能与 SSR 标记一样将遗传关系很近的桃品种区分开来，而且 SRAP标 记 比 SSR标 记更有 效、快捷 、成本 低。 Budak等 ?用 SRAP标记对野牛草和草坪草的遗传 多样性进行了分析，用 34个 SRAP引物组合将53 收稿日期：2o05—12—22 基金项目：国家863项目(2003AA207150) 作者简介：文雁成(1965一)，男，博士研究生，副研究员，从事油菜遗传育种研究。 ·通讯作者，TEL：027email：wanghz@oilerops．I21。 234 中国油料作物学报 2006，28(3) 个野牛草种质分成了 8个类别，认为 SRAP标记能 够有效地分析野牛草和草坪草遗多样性、历史演化