蛋白质多重标记讲述.pptVIP

? 赖氨酸的ε-氨基 ? 一个N端的伯胺 + 20个赖氨酸残基 对于GFP来说 238个 氨基酸 ? FQ如何标记GFP？ 如果标记GFP中所有的伯胺基团？ 理论上可行 而且如果能同时快速标记所有 就不会存在展宽严重问题 但实际这实际非常复杂 在赖氨酸上百个的蛋白质中 这种方法难度太大 无法做到 ? 只标记一个或几个伯胺基团？ 产物会非常多 N个标记位点 会产生2n-1种标记产物 在电泳时 自然泳动速度有差异谱带展宽非常严重 不确定性！！！ ? FQ+蛋白质→FQ蛋白质复合物 FQ蛋白质复合物+FQ→2FQ蛋白质复合物 ······ ? 影响反应的因素： 反应的温度 蛋白质的结构 FQ的浓度 反应时间 。。。 ? 时间： 反应时间越长 与蛋白质结合的FQ越多 蛋白质与FQ生成复合物越多 出峰展宽越严重 ? 如何解决这一问题？ ? THANK YOU 阅读文献 Multiple Labeling of Proteins Design of 3-(4-Carboxybenzoyl)-2-quinolinecarboxaldehyde as a Reagent for Ultrasensitive Determination of Primary Amines by Capillary Electrophoresi