低温胁迫对尼罗罗非鱼水通道蛋白基因_AQP1_表达的影响讲义.pdfVIP

中国水产科学 2014年 11月, 21(6): 1181?1189 Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 收稿日期: 2013-12-20; 修订日期: 2014-03-05. 基金项目: 国家自然科学基金项目; 广东省自然科学基金资助项目(9451038001003595); 现代农业产业技术体系资金资 助项目(CARS-49);国家科技支撑计划专项资金资助项目(2012BAD26B03); 中国水产科学研究院基本科研业务费资助 项目(2012A0404). 作者简介: 朱华平(1977?), 男, 博士, 研究方向为鱼类遗传育种．E-mail: zhhping2000@163.com 通信作者: 卢迈新, 研究员. Tel: 020 E-mail: mx-lu@163.com DOI: 10.3724/SP.J.1118.2014.01181 低温胁迫对尼罗罗非鱼水通道蛋白基因(AQP1)表达的影响 朱华平, 刘玉姣, 刘志刚, 卢迈新, 高风英, 可小丽, 黄樟翰 中国水产科学研究院 珠江水产研究所, 农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室, 广东 广州 510380 摘要: 以经过连续多代抗寒选育获得的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)耐寒品系为实验材料, 克隆了尼罗罗非 鱼水通道蛋白基因(AQP1)的 cDNA序列, 并采用实时荧光定量 PCR分析方法探讨了低温胁迫对罗非鱼 AQP1基因 表达水平的影响。序列分析结果显示, 尼罗罗非鱼 AQP1 cDNA长度为 1 098 bp, 包含 36 bp的 5′端非翻译区序列、 783 bp开放阅读框(ORF)和 279 bp的 3′非翻译区序列, 编码 261个氨基酸。氨基酸序列比对表明, 各物种间 AQP1 序列的同源性较高(96%~59%)。聚类分析表明 , 尼罗罗非鱼首先与同属鲈形目丽鱼科的斑马拟丽鱼(Maylandia zebra)聚在一起, 再与其他硬骨鱼类聚为一类。实时荧光定量 PCR 结果表明: 在水温从 30℃逐渐降到 10℃过程中, 肌肉和肝组织 AQP1 基因的表达量从 20℃开始均逐渐下调。其中肌肉组织中, 与 30℃时的表达量相比, 耐寒品系 在 20℃时表达量大幅度下调, 当水温为 15℃时, 其表达量下调幅度为 22.16 倍。当水温降到 10℃时, 其表达量下 调了 107.73倍。而对照组 AQP1基因的表达量在 15℃时, 下调幅度为 5.38倍。当水温达到 10℃时, 其表达量下调 幅度为 11.30 倍。结果分析显示, 耐寒品系与对照组 AQP1 基因在低温条件下的表达量存在显著性差异(P0.05)。 而在肝组织中, 当水温降到 15℃时, 耐寒品系和对照组的表达量下调幅度分别为 3.38倍、1.42倍。水温降到 10℃ 时, 其表达量上调幅度分别为 18.85倍、9.01倍。结果分析表明, 低温条件下耐寒品系与对照组 AQP1基因在肝组 织中的表达差异不显著(P0.05)。结果表明, AQP1表达对温度敏感, 耐寒品系较高的耐寒能力与其在低温条件下的 肌肉组织大幅上调表达有关。由此可见, AQP1基因在罗非鱼低温适应过程中发挥重要作用, 是潜在的研究罗非鱼 耐寒机制的候选基因之一, 本研究为进一步研究罗非鱼的耐寒分子机制和开展鱼类抗逆育种提供参考。 关键词: 尼罗罗非鱼; 低温胁迫; 水通道蛋白基因; 实时荧光定量 PCR; 基因表达 中图分类号: S91 文献标志码: A 文章编号: 1005?8737?(2014)06?1181?09 罗非鱼作为世界重要的养殖鱼类, 现已成为 中国主要的出口商品鱼之一。罗非鱼为温水性鱼 类, 主要分布于热带、亚热带地区。水温是影响 罗非鱼生存、生长的重要环境因子之一, 其变化 会导致罗非鱼产生一系列的生理生化变化, 尤其 是低温对罗非鱼的新阵代谢、神经内分泌、细胞 膜流动性、物质运输以及免疫机能影响较大。罗 非鱼对低温敏感, 低温可以引起莫桑比克罗非鱼 (Oreochromis mossambicus)Na+-K+ ATPase活力的 降低, 血浆渗透压先升后降, 从而导致莫桑比克 罗非鱼冬季大量死亡 [1], 也可以引起尼罗罗非鱼 (O. niloticus)血液中皮质醇、肾上腺素、去肾上腺 素等含量的升高, 血清中溶菌酶活力、补体 3 和 补体 4 含量等免疫指标的降低, 导致鱼体免疫力 的下降[2–3]。罗非鱼在细胞物质运输方面的