虾夷马粪海胆CYP17基因的克隆及其表达差异.pdfVIP

第28卷第1期 2 0 1 3年2月 大连海洋大学学报 JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIVERSnY V01．28 No．1 Feb．201 3 文章编号：2095—1388(2013)Ol一0001—06 虾夷马粪海胆CYPl7基因的克隆及其表达差异 郭晓黎1、2，仇雪梅1、2，常亚青1、2，张伟杰1、2，崔军2， 丛玉婷2，吴领知2，刘洋2，王秀利1、2 (1．大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室，辽宁大连116023；2．大连海洋大学水产与生命学院，辽宁大连116023) 摘要：采用分子生物学方法成功克隆了虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius CYPl7基因。该基因的 cDNA全长为1 570 bp，其中开放阅读框1 482 bp，编码493个氨基酸；CYPl7蛋白的相对分子质量约为 55 540，等电点为8．068，信号肽断裂位点位于第18和第19个氨基酸残基之间；虾夷马粪海胆的CYPl7氨 基酸序列与紫球海胆spurpuratus的同源性为97％，与光棘球海胆S．nudus的同源性为96％。用RT-PCR 技术对CYPl7基因在虾夷马粪海胆生殖腺不同发育时期的表达差异进行了分析。结果表明：在虾夷马粪海 胆3个家系的雄性个体生殖腺中，CYPl7基因在1—3家系的表达量最高，依次为10—3家系、6-2家系，而 在雌性个体生殖腺中，CYPl7基因在10—3家系的表达量最高，依次为l一3家系、6—2家系；在4—1家系 海胆3个不同发育时期，CYPl7基因在雄海胆性腺中的表达量随着日龄的增加而增加，而雌海胆性腺在发 育第430天到第447天时表达量略有增加，发育到第512天时表达量明显增加。本研究表明，CYPl7基因 在海胆雌、雄个体生殖腺中转录水平上的表达差异明显，雄性的表达量明显高于雌性。 关键词：虾夷马粪海胆；CYPl7基因；克隆；基因表达 中图分类号：$917 文献标志码：A 海胆的可食用部分为生殖腺，其生殖腺有着生 殖和储存营养的双重作用¨J。海胆的生殖腺含有 大量蛋白质、氨基酸、高度不饱和脂肪酸、糖类等 具有特殊生理活性的物质，特别是含有防治心血管 疾病的有效药物成分，具有较高的营养和药用价 值口1。虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius 原产于日本北海道和俄罗斯远东沿海，由于其生殖 腺色泽好、味甜，在国际市场广受欢迎。大连海洋 大学于1989年将虾夷马粪海胆从日本引入中国， 目前已成为中国北方沿海特别是辽东和山东半岛养 殖的重要海珍品H1。 CYPl7是细胞色素P450家族的重要成员之 一。CYPl7基因编码的细胞色素P45017ct羟化酶／ 17，20裂解酶(17a—hydroxylase／17，20-1yase)是 类固醇激素合成的关键酶之一，该基因的表达水平 可在一定程度上决定动物体内性激素的水平H1。 CYPl7是合成雄激素的关键类固醇激素生成酶，同 时对雌激素合成也是必不可少的(由雄激素芳香 化而来)，在生殖内分泌中发挥重要作用”曲1。 CYPl7具有两种酶活性，即17a一羟化酶和17，20一 裂解酶活性，前者可以催化孕酮或黄体酮转化成 17cx一羟基孕酮，后者继续催化17a一羟基孕酮转化 成雄烯二酮。雄烯二酮再经过1713一HSD(1713-羟 类固醇激素脱氢酶)生成睾酮，然后再在P450芳 香化酶(CYPl9)作用下转化为1713-雌二醇。而 雌二醇是类固醇激素，参与繁殖过程的调控，包括 性别分化、性成熟和其他方面，因此，体内雌二醇 在空间和时间上的平衡对机体执行正确的机能非常 重要。卜8l，对性腺的生长和发育起关键的调节作 用。本研究中，作者首次克隆了虾夷马粪海胆 CYPl7基因的cDNA序列，并对该基因在不同家系 雌、雄个体以及同一家系不同生殖腺发育阶段的表 达进行了分析，旨在为今后利用该基因辅助育种培 育虾夷马粪海胆优良品种提供参考。 收稿日期：2012-12-07 基金项目：辽宁省自然科学基金资助项目；辽宁省“百千万人才工程”项目(2010921093)；大连海洋大学科研项目 (2012HYDX02) 作者简介：郭晓黎(1984一)，女，硕士研究生。E-mail：xiaolitbl984@sina．corn 通信作者：仇雪梅(1964一)，女，博士，教授。E-mail：xmqiu@dlou．edu．cn 2 大连海洋大学学报 第28卷 1材料与方法 1．1材料 1．1．1 试验动物虾夷马粪海胆取自大连海洋大 学农业部北方海水增养殖重点实验室。于2010年 7月分别选取相同日龄的6—2、10—3、1—3家系虾 夷马粪海胆(均为2008年10月培育)，于2010年 8月4日、9月