地高辛标记DNA探针快速筛选肿瘤细胞株基因表达差异.pdfVIP

基金项目：吴阶平医学基金（ ＦＷＭＮ２０１１Ｌ００７ ） 文章编号： １００７ ４２８７ （ ２０１２ ） ０２ ０２０４ ０３ 地高辛标记 ＤＮＡ 探针快速筛选 肿瘤细胞株基因表达差异 汪永强１，殷运忠１，李传达１，袁平宗１，罗 鹏２，娄 冲１ （ １． 内江市第二人民医院 检验科／泸州医学院附属内江医院，四川 内江 ６４１１００ ； ２． 重庆医科大学第一附属医院 检验科，重庆 ４０００１６ ） 摘要：目的 建立寡核苷酸探针正向斑点杂交技术，快速筛选不同细胞株同一基因 ＨＩＦ１ａ 表达差异，探讨斑点 杂交筛选基因表达的可行性。方法 将多种培养肿瘤细胞株提取总 ＲＮＡ 后，点样于尼龙膜上，与地高辛标记的 ＨＩＦ１ａ 基因探针杂交，结果与半定量 ＲＴＰＣＲ 结果比较。结果 斑点杂交实验结果与 ＲＴＰＣＲ 结果一致，无统计学 差异（ Ｐ ＞ ０．０５ ）。结论 用随机引物地高辛标记 ＤＮＡ 探针可以快速筛查不同细胞株同一基因表达差异，可以作为研 究肿瘤基因表达差异的工具。 关键词：地高辛；探针；肿瘤细胞；基因表达 中图分类号： Ｑ７８６ Ｒ７３０２ 文献标识码： Ａ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ ｇ ｅｎｅｅｘ ｐ ｒｅｓｓｉｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｉｎｅｓｒａ ｐ ｉｄｌ ｙ ｗｉｔｈＤＮＡ ｐ ｒｏｂｅｌａｂｅｌｅｄｂ ｙ Ｄｉ ｇ ｏｘｉｎ ＷＡＮＧＹｏｎ ｇ  ｑ ｉａｎ ｇ ， ＹＩＮＹｕｎｚｈｏｎ ｇ ， ＬＩＣｈｕａｎｄａ ， ｅｔａｌ． （ ＴｈｅＳｅｃｏｎ ｇ Ｈｏｓ ｐ ｉｔａｌｏ ｆ Ｎｅｉ ｊ ｉａｎ ｇ Ｃｉｔ ｙ ／ ＴｈｅＡ ｆｆ ｉｌｉａｔｅｄＮｅｉ ｊ ｉａｎ ｇ Ｈｏｓ ｐ ｉｔａｌ ， ＬｕｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔ ｙ ， Ｎｅｉ ｊ ｉａｎ ｇ ６４１１００ ， Ｃｈｉｎａ ） Ａｂｓｔｒａｃｔ ： Ｏｂ ｊ ｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｅｓｔａｂｉｌｉｓｈｄｏｔｂｌｏｔｈ ｙ ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏ ｇｙ ｉｎｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＨＩＦ１ａ ｇ ｅｎｅｅｘ ｐ ｒｅｓｓｉｏｎｏｆ ｖａｒｉｏｕｓｔｕｍｏｒｃｅｌｓａｎｄｔｏｅｘ ｐ ｌｏｒｅｔｈｅａｖａｉｌａｂｉｌｉｔ ｙ ｏｆｄｏｔｂｌｏｔｉｎｓｃｒｅｅｎｉｎ ｇｇ ｅｎｅｅｘ ｐ ｒｅｓｓｉｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｎｕｃｌｅａｒ ａｃｉｄｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍａｖａｒｉｅｔ ｙ ｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｔｕｍｏｒｃｅｌｌｉｎｅｓａｎｄｓ ｐ ｏｔｔｅｄｏｎｔｈｅｎ ｙ ｌｏｎｍｅｍｂｒａｎｅ ， ｄｏｔｂｌｏｔａｎａｌ ｙ ｓｉｓａｎｄ ｓｅｍｉ ｑ ｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＲＴＰＣＲｗｅｒｅｃａｒｄｅｄｏｕｔｒｅｓ ｐ ｅｃｔｉｖｅｌ ｙ ｔｏｄｅｔｅｃｔＨＩＦ１ａ ｇ ｅｎｅｅｘ ｐ ｒｅｓｓｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｄｏｔｂｌｏｔｈ ｙ  ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓａｒｅｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｈｅＲＴＰＣＲ．ｉｔｄｉｄｎｏｔｒｅａｃｈｔｈｅｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｌｅｖｅｌｏｆｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｓｉ ｇ ｎｉｆｉｃａｎｃｅ （ Ｐ ＞ ０．０５ ） ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｄｏｔｂｌｏｔｈ ｙ ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｗｉｔｈＤＩＧｌａｂｅｌｅｄＨＩＦ１ａ ｐ ｒｏｂｅｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｓｃｒｅｅｎ ｑ ｕｉｃｋｌ ｙｇ ｅｎｅｅｘ ｐ ｒｅｓｓｉｎ ｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｓａｎｄｓｅｒｖｅａｓａｒｅｓｅａｒｃｈｔｏｏｌｆｏｒｔｕｍｏｒ ｇ ｅｎｅｅｘ ｐ ｒｅｓｓｉｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ． Ｋｅ ｙ ｗｏｒｄｓ ： Ｄｉ ｇ ｏｘｉｎ ； ｐ ｒｏｂｅ ； ｔｕｍｏｒｃｅｌｓ ； ｇ ｅｎｅｅｘ ｐ ｒｅｓｓｉｏｎ （ ＣｈｉｎＪＬａｂＤｉａ ｇ ｎ ， ２０１２ ， １６ ： ０２０４ ） 肿瘤的发生与发展的主要病因之一是癌基因的 激活或抑癌基因的失活，目前临床开展的肿瘤标志 物主要包括糖类、蛋白质类以及激素类，对基因类肿 瘤标志物开展较少，因此，探讨和寻找基因类肿瘤标 志物的检测方法已受到广泛关注［１，２］。缺氧是导致 恶性实体肿瘤预后差的主要原因之一，缺氧诱导因 子 １ａ （ ｈ ｙｐ ｏｘｉａｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ１ａ ， ＨＩＦ１ａ ）是各种 细胞对缺氧应答的一个重要转录因子，在多数肿瘤 细胞中呈高表达［３，４］，本研究拟用地高辛标记 ＨＩＦ １ａｃＤＮＡ 探针，检测各类肿瘤细胞株中 ＨＩＦ１ａ ｍＲＮＡ 表达水平，并与 ＲＴＰＣＲ 法比较，探讨斑点 杂交方法筛选基因表达的可行性。 １ 材料与方法 １．１ 材料 各类肿瘤细胞株（乳腺癌 ＭＣＦ７ 细胞，