高中生物 第二章 第2节 单克隆抗体课件 新人教版选修3.pptVIP

单克隆抗体 获得杂交细胞 制备单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 杂交前细胞处理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 比较植物、动物细胞融合 * 单克隆抗体 1.常规抗体的制备 方法 ： 缺陷： 向动物体内反复注射某种抗原，使动 物产生抗体，然后从动物血清中分离 所需抗体。 产量低，纯度低，特异性差。 为什么产量低？ 为什么纯度低？ * 1.抗原诱导动物产生的效应B细胞数量有限。 2.抗原比较复杂，可能诱导产生多种效应B细胞，产生多种抗体。 3. 另动物在未接触注射的抗原之前，体内可能就存在多种效应B细胞，多种抗体。 据研究，动物在免疫的过程中，体内产生的特异性抗体种类可达百万种以上，但每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 如何获得纯度高、产量大的抗体呢？ * 设计方案： 一个B淋巴细胞（只分泌一种特异性抗体） 小鼠骨髓瘤细胞 （能无限增殖） 细胞融合 克隆 杂交瘤细胞 大量抗体 * （1）.定义：克隆单一的杂交瘤细胞 所产生的大量抗体。 2、单克隆抗体 由于每个Ｂ淋巴细胞只能分泌一种抗体，则每个杂交瘤细胞只能分泌一种抗体，由一 个杂交瘤 细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份也是单一的。 * （2）制备过程（图解）： 1注射抗原的目的是什么？ 2从小鼠脾脏中提取的B细胞都能产生抗体吗？ 3都能产生所需抗体吗？ 1诱导其融合的方法有哪些？ 2为什么要用许多B细胞和许多瘤细胞融合？ 3用一个B细胞和1个瘤细胞融合行吗？ 1融合后培养液中有几种细胞？ 2其中杂交瘤细胞有几种？ 1怎样筛选出杂交瘤细胞？ 2淘汰了哪些细胞？ 3筛选出的杂交瘤已经符合要求了吗？ 4杂交瘤细胞有何优点？ 1为何要进行克隆化培养？ 2为何进行专一抗体检测？ 3筛选的出杂交瘤细胞为什么还要再次筛选，并多次筛选？怎样筛选？ 1注射到小鼠血液中培养行吗？ 2体内培养为何优于外培养？ * 整个制备过程至少要经过两次筛选 第一次筛选在选择性培养基上进行，得到杂交瘤细胞（多种）， 第二次筛选在多孔培养板上进行，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，并进行专一抗体检测，从而筛选出能产生特异性抗体的细胞群。该筛选要重复多次，确保筛选出的细胞群来自单个杂交瘤细胞。 细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。 * 介绍一种选择性培养基 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，在筛选培养基上筛选获得杂种细胞。 * （2）过程(文字) B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 B-B细胞 B-瘤细胞 瘤-瘤细胞 选择培养 杂交瘤细胞（ B-瘤细胞） 克隆化培养 抗体检测 获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 * （3）.单克隆抗体的应用： 单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大 ①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的微细差异，并与其特异性结合。具有准确、高效简易、快速的优点。如“早早孕诊断试剂盒”。 ②用于 运载药物：制成“生物导弹”=抗癌细胞 的单克隆抗体+药物 药物：放射性同位素、化学药物和毒素等物质 治疗疾病：主要用于癌症治疗 * 问题思考 除通过杂交瘤细胞产生单克隆抗体外，还有什么方法？ * 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） 　 A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞 A * 2..动物细胞融合的目的中最重要的是----------------（ ） A.克服远缘杂交不亲和 B. 制备单克隆抗体 C.培育新品种 D.生产杂种