HE切片的质量控制.doc

HE切片的质量控制 一张高质量的HE切片要做到以下几点： 切片完整，贴片恰当 切片较薄二均匀 无皱折 无刀痕 染色清晰、核浆分明、透明度好 无固缩、龟裂、污染 封胶适当、玻片清洁 字体端正，号码清楚 组织化学技术操作规范 组织化学技术制片与一般的制片基本相同，但在操作上有其特殊的要求。 组织化学技术对组织细胞前处理的要求 组织切片方法 根据所检测物质的性质及所采用的染色方法，组织切片分为冷冻切片和石蜡切片（培养的细胞也可分为细胞涂片、细胞冷冻切片和细胞石蜡切片）。在冷冻切片，组织细胞的各种成分丢失最少，但形态结构差，可溶性物质弥散：石蜡切片中组织细胞的许多特殊物质减少甚至丢失，酶活性降低甚至失去活性，但形态结构好，所需显示的物质定位清晰。 组织的固定 无论用于冷冻切片的组织，取材越新鲜越好，以保持生物体的原状，使细胞内的化学成分尽可能保存下来。组织取材后应立即进行冷冻切片，切片可于-20或-80度保存。若作石蜡切片，组织取材后即进行固定，因所检测的物质不同选用不同的固定液及固定时间最常用的固定方法是用固定液浸泡组织。固定液有多种，不同的固定液具有不同的作用，至今还没有一种固定液能用于所有染色的组织固定，最常用、用途最广的是甲醛液。欲保存固定肝糖原则不能使用甲醛固定液，需要用酒精固定液，如gender或cranky氏固定液。在组织固定过程中，不能溶解细胞内的化学物质，使所显示的物质不会出现移位现象，定位准确。如用酒精性固定液固定肝糖原，会将糖原颗粒推向细胞的一边，称为“极化现象”，属于一种人为改变，对定位有影响，在观察时应注意。 组织化学染色方法的基本要求 组织化学染色方法要有较高要求的特异性，能特异性显示所有需要观察的物质组织化学染色与常规HE染色的不同，每种组化反应都需要某种特殊的染料、试剂或底物，需要一定的染色时间和PH环境，使该反应对所显示的物质具有一定的专属性。如显示糖原需要用schiff无色品红试剂；显示铁离子应用亚铁氰化钾和盐酸；显示碱性磷酸酶需用β-甘油磷酸钠作底物，PH9.4的环境下进行反应。在染色操作过程中，应采用已知含有或不含有所显示的物质的标本进行阳性和阴性对照，已证实该方法的特异性和操作的准确性。如显示碱性磷酸酶，可用正常的肾组织进行对照，肾皮质碱性磷酸酶应为阳性为髓质应为阴性。也可用抑制剂和消除法进行阴性对照。如在孵育液中加入0.01mol/L的氟化钠可抑制酸性磷酸酶的活性，染色结果则为阴性，在糖原染色前，用淀粉酶消化对照的组织切片，则对照片糖原染色为阴性。 组织化学染色方法要具有一定的敏感性，方法越是灵敏，越是能检测组织细胞中含量少的物质。 组织化学染色在组织或细胞内所产生地反应产物必须具有一定的颜色，该颜色越鲜艳、越深越好。显示一种物质可有不同的染色方法，阳性反应有不同的颜色，选用的方法应使阳性物质越鲜艳、深色，而复杂的底物要浅淡，这样对比才清晰，易于观察及照相。 组织化学染色最后显示出来的物质要具有稳定性，尽可能不被制片过程中所用地化学试剂所影响。在染色过程中，避免使用减弱、破坏或溶解阳性物的试剂。如着染苏丹的脂肪要用水溶性胶片封片，不能经二甲苯和中性树胶封片。 组织化学技术的某些方法还存在着不能完善的地方，如果保持较好的组织细胞形态结构，使被检测的物质定位准确，则需要用石蜡切片染色，但组织在制作石蜡切片的固定、脱水和包埋过程中，被检测的物质会受到破坏甚至消失.如在石蜡切片中，肾组织的酸性磷酸酶活性仅保留20%；心肌的琥珀酸脱氢酶则全部消失活性，在肝糖原染色中用10%的甲醛液固定肝组织可使肝糖原颗粒出现“极化现象”。用冷冻切片可保存大量的酶，酶原丢失极少，又不会出现“极化现象”。但组织结构形态结构及阳性物质的定位较差。此外，冷冻切片容易出现结晶。破坏原有组织的结构，影响观察。有些存在于组织细胞中的化学物质较为复杂，往往需要用多种染色方法来进行鉴别，如用AB（PH2.5）法可显示一般的粘液；区分中性和酸性粘液需要用AB-AS染色法；酸性粘液中要区分硫酸粘液和唾液粘液要用HID-AB染色法。 1