富组蛋白1促进人表皮细胞_人成纤维细胞增殖和迁移在创伤愈合中的作用及机制研究44_.kdh.pdfVIP

第三军医大学博士学位论文 第二部分 富组蛋白 1 促进人成纤维细胞增殖和 迁移在创伤愈合中的作用研究 前一部分实验得出结论：Hst1 可以促进非口腔黏膜细胞—人表皮 HaCaT 细胞株的 增殖和迁移，为了更深入探讨该蛋白对皮肤创伤愈合的影响，在这一部分，我们以另一 种与皮肤创伤愈合密切相关的细胞—人成纤维细胞株（HF）为研究对象[39,40]，考 察 Hst1 对该细胞增殖、迁移功能的影响。结果证实，Hst1 具有促人成纤维细胞增殖作用，但促 迁移作用较弱。 实验材料 1. 人成纤维细胞株(HF)：美国标准生物品收藏中心。 2. DMEM培养基：美国Hyclone 公司。 其余试剂、仪器同第一部分。 实验方法 一、人成纤维细胞培养 无菌条件下将细胞接种至培养瓶，浓度10%NBS的DMEM培养基为培养液，37 ℃、 5％CO2培养箱条件下培养。培养过程中根据细胞生长状态及时换液，待细胞长至90％融 合时，0.25%胰蛋白酶溶液培养箱条件下消化1 min，培养液终止消化，吹打收集细胞， 细胞悬液于离心机1000 rpm，离心5 min，弃上清，培养液重悬，再次接种于细胞培养板 或培养瓶。 二、Hst1作用下HF细胞增殖情况测定 （一）细胞计数法检测细胞增殖状况：同第一部分。 （二）MTT法检测细胞增殖状况：同第一部分。 （三）流式细胞术检测细胞周期：同第一部分。 三、Hst1作用下人成纤维细胞体外愈合率的测定 同第一部分。 四、丝裂霉素作用下Hst对HF细胞株体外创伤愈合率的影响 35 第三军医大学博士学位论文 同第一部分。 五、统计学处理 同第一部分。 实验结果 一、3 μg /mL～100 μg /mL Hst1能够促进HF增殖。 （一）细胞计数法结果显示：细胞培养后24 h～72 h内，A组～E组细胞数较同一时 相点对照组均增加（t值为4.062～47.370，P＜0.01或P＜0.05）。 A组～C组培养细胞后24 h，A组细胞数较C组提高（t=4.040，P＜0.05）， 其余组间 比较差异无显著性（t=1.044，2.891，P＞0.05）；培养后48 h，B组，C组细胞数较A组提 高（t=3.661，6.680，P＜0.05或P＜0.01），而B组与C组比较细胞数无统计学差异（t=0.673， P＞0.05）。培养后72 h，B组细胞数较A组，C组明显提高（t=11.808，5.349，P＜0.01）。 A组与C组细胞数无统计学差异（t=1.341，P＞0.05）。 24 h～72 h内，D组与A组同一时相点细胞数差异均无统计学意义（t值为0.485～ 2.462，P＞0.05）；同一时相点，E组联合使用Hst1和rhEGF较单一使用Hst1或rhEGFA组～ D组相比，细胞数显著增加（t值为3.857～20.045，P＜0.01）。 A组～C组培养细胞后48 h较同组培养后24 h，培养后72 h较同组培养后48 h细胞数 均提高（t值为2.854～30.055，P＜0.01或P＜0