实验三紫外-可见分光光度计的使用.doc

专业综合实验1电子教案 PAGE  PAGE 5 实验二 紫外-可见分光光度计的使用 （ultraviolet-visible spectroscopy） 教学目标： 1、学习使用紫外-可见分光光度计的使用。 2、掌握紫外-可见分光光度计的基本构造。 3、练习使用紫外-可见分光光度计对药物成分的鉴定。 教学重点： 1、紫外-可见分光光度计的构造。 2、紫外-可见分光光度计的使用。 教学难点： 1、紫外-可见分光光度计的构造。 2、紫外-可见分光光度计的使用。 教学方法：分层次教学。 教学时数：4学时。 教学过程: 一、分层次教学 根据班级学生层次，本实验分为两层次：一为初级层次，二为高级层次。初级层次要求初步学会仪器的使用，了解仪器工作原理。高级层次在初级层次的基础上，进行药物含量的测定。 二、紫外光谱的基本原理 紫外-可见光谱（ultraviolet-visible spectroscopy，UV-Vis），也简称紫外光谱（UV），是吸收光谱的一种。 紫外光谱与电子跃迁有关，分子中价电子经紫外或可见光照射时，电子从低能级跃迁到高能级，此时电子就吸收了相应波长的光，这样产生的吸收光谱叫紫外光谱。 紫外吸收光谱的波长范围是100-400 nm(纳米)，其中100-200 nm 为远紫外区，200-400 nm为近紫外区，一般的紫外光谱是指近紫外区，可见区400-800 nm。 可以跃迁的电子有：s，p和n电子。 跃迁的类型有：s ?s*，n ? s*，p ? p *，n? p *。 一般的紫外光谱是指近紫外区( 200-400 nm)，只能观察 p ? p *和 n? p *跃迁。也就是说紫外光谱只适用于分析分子中具有不饱和结构的化合物。 三、紫外光谱的表示法 1、紫外吸收带的强度 吸收强度标志着相应电子能级跃迁的几率，遵从Lamber-Beer定律： A = lg (I0 / I) = ?cl A：吸光度；e：消光系数； c：溶液的摩尔浓度，l：样品池长度 I0、I分别为入射光、透射光的强度 2、紫外光谱的表示法 UV图由横坐标、纵坐标和吸收曲线组成。 横坐标表示吸收光的波长，用nm为单位。 纵坐标表示吸收光的吸收强度，可以用A（吸光度）、T（透射比或透光率或透过率）、1-T（吸收率）、k（吸收系数）中的任何一个来表示。 T = I / I0 吸收曲线表示化合物的紫外吸收情况。曲线最大吸收峰的横坐标为该吸收峰的位置，纵坐标为它的吸收强度。 四、紫外-可见分光光度计的组成 1、组成 测量紫外光、可见分光光区吸光度的仪器目前仍以色散型的紫外-可见分光光度计为主。组成：光源、单色器、样品室、检测器、放大控制系统和显示系统等六个部分组成。 2、分类 （1）根据工作波段不同分类： A、真空紫外分光光度计（0.1 nm ~ 200 nm） B、可见分光光度计（350 nm ~ 700 nm） C、紫外-可见光光度计（185 nm ~ 900 nm） D、紫外-可见-近红外分光光度计（185 nm ~ 2500 nm） （2）根据光度学和记录系统不同分类 A、单光束手动式分光光度计 B、双光束自动记录式分光光度计 （3）根据同时提供的波长数不同分类 A、单波长分光光度计 B、双波长分光光度计 （4）根据扫描速度不同分类：动力学分光光度计 （5）根据是否分光分类 A、傅里叶变换紫外-可见光谱仪 B、色散型紫外-可见分光光度计 3、单光束分光光度计 单光束分光光度计只有单色器色散后的一束单色光，它是通过改变参比池和样品池的位置进行参比溶液和样品溶液的交替测量待测定样品溶液的吸光度。目前国内普遍应用的721型和751型属于此类，常用于定量分析。 4、双光束分光光度计 双光束分光光度计是将单色器色散后的单色光分成两束，一束通过参比池，一束通过样品池，一次测量即可得到样品溶液的吸光度。双光束分光光度计的特点是便于进行自动记录。 五、紫外-可见分光光度计的应用 1、推断官能团 如果一个化合物在紫外区有强的吸收，表明它可能存在共轭体系，吸收波长越长，共轭体系越大。 2、判断异构体 不同的异构体可能具有不同的紫外光谱，以此来判断属哪个异构体。 3、推断分子结构（骨架） （可结合Woodward规则的计算结果）。 4、分子量的测定 5、定量分析的应用 朗伯-比尔定律。 6、医药研究 抗癌药物对 DNA 变性影响的研究、人血清与癌细胞关系的研究。 六、实验部分（醋酸地塞米松含量的测定） （一）样品溶液的配制 1、取本品10片，精密称定，研细，再精密称取0.4g（约醋酸地