第4章动物细胞的微囊化培养.ppt

一、微囊法（microencapsulation）: 用一层亲水的半透膜将细胞包围在珠状的微囊里，细胞不能逸出，但小分子物质及营养物质可自由出入半透膜；囊内是种微小培养环境，与液体培养相似，能保护细胞少受损伤，故细胞生长好、密度高。;图4－1 　微胶囊示意图;二、研究发展历程;2、“人工细胞” ——“人工胰腺” 80年代初, Lim等人将微囊化技术与组织细胞移植相结合, 制备了海藻酸钠/聚赖氨酸(APA)微胶囊, 包埋猪胰岛细胞形成“人工细胞”, 并移植入糖尿病大鼠体内, 结果成功地调节了血糖水平, 代行了大鼠胰腺功能, 因而被称为“人工胰腺”。该成果较好地解决了组织细胞移植过程的免疫排斥问题, 避免或减少了昂贵的免疫抑制剂的使用, 为组织细胞移植治疗神经/内分泌系统疾病提供了新思路。 ;3、90年代以来, 医学界开始尝试以微胶囊作为基因重组细胞的免疫隔离和运载工具, 利用重组细胞的代谢产物调节机体生理功能, 治疗相关疾病。 ;4、目前，微胶囊的应用研究涉及药物控制释放、 动植物细胞培养、细胞和酶的固定化以及生化物质分离等领域, 已经成为材料、化学、化工、生物和医学等多学科领域工作者的研究热点。;不同放大倍数的海藻酸钙微胶囊的SEM 照片;三、性质： 曾是酶固定化技术中的一种（半透膜将酶包裹在球状的微囊里，酶及大分子不能从微囊里透出，而小分子物质可自由通过膜）。 动物细胞微囊化后，与游离细胞相比，降低了培养时对细胞的剪切力，同时也能提供很高的细胞密度，使得产物浓度增加，纯度提高。 动物细胞微囊化培养的成功为干扰素、乙肝表面抗原(HBsAg)、单克隆抗体(MAb)等)的产生提供了广泛应用前景。? ;表4－1 微胶囊制备材料 ;; 四、 微囊化培养技术要点: 在无菌条件下将拟培养的细胞、生物活性物质及生长介质共同包裹在薄的半透膜中形成微囊, 再将微囊放入培养系统内进行培养。生长介质为1.4%海藻酸钠溶液, 半透膜由多聚赖氨酸形成。培养系统可采用搅拌式或气升式反应器系统，微囊直径控制在200-400μm为宜。 ;五、动物细胞微囊化的制备;;聚赖氨酸/海藻酸微囊化步骤：; 制备注意事项： ●温和、快速、不??伤细胞，尽量在液体和生理条件下操作； ●所用试剂和膜材料对细胞无毒害； ●膜的孔径可控制，必须使营养物和代谢物自由通过； ●膜应有足够机械强度抵抗培养中搅拌。 ;①可防止细胞在培养过程中受到物理损伤; ②活性蛋白不能从囊中自由出入半透膜, 从而提高细胞密度和产物含量, 并方便分离纯化处理。;七、微胶囊在生物医学领域应用研究 ;2、在生化药物控制释放中的应用研究 微胶囊膜能最大程度地保持囊内生化物质（生长激素、胰岛素、肝素、干扰素、促甲状腺素、人类免疫缺损疫苗）活性, 不同程度地提高了药物的生物利用度。通过调节制备条件可以控制微胶囊膜的厚度和孔尺寸，从而实现囊内生化药物的控释或缓释 。 临床应用的主要技术问题： 如何更好地保持囊内蛋白质的生物活性； 作为控制释放载体的微胶囊材料的生物相容性； 开发条件温和且易于规模化生产的微胶囊制备技术。 ; 作业： 试述动物细胞培养的常用方法。 最常用的微囊化培养的方法是什么?其原理及操作过程? 为什么要进行微载体培养?动物细胞微载体培养的主要优点? 优良的微载体应该具备什么特性?试述主要的微载体种类?