动物外周血白细胞分离液试剂盒使用说明.pdf

动物外周血白细胞分离液试剂盒使用说明 保存: 18-25℃避光保存，有效期 2 年。 名称 规格 动物外周血白细胞分离液 200ml 红细胞裂解液 100ml 全血及组织稀释液 200ml 细胞洗涤液 200ml 产品说明 本产品适用于从动物抗凝血液中分离白细胞，无菌条件下所分离的白细胞可用于分子生物学 及细胞培养等。本产品启封后置 4℃保存，溶液变浑浊或感染细菌时，产品失效。本品为真 空包装，未启封前置于 10℃ 以下易出现白色结晶，影响分离效果。本品仅供科研使用。 实验要求 本分离液要求血液为新鲜的抗凝血，血液收集时应无菌操作且在储存、处理和运输过程中避 免冷冻和冷藏。本实验需要半径 15cm 水平转子离心机。在正常大气压下，样本、分离液及 分离环境温度为 18-22℃。本分离液在低温时呈较高密度，在高温时呈较低密度。 注意事项 1. 使用前，本分离液需复温至18-22℃。为获得最佳的实验结果，最好在取血后2小时内进 行实验，血液提取后存放时间越长细胞活性越低。 2. 实验过程中，如需稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其 成分会导致血细胞凝集大大降低细胞得率及纯度。本公司生产的全血及组织稀释液和细胞洗 涤液不含Ca、Mg离子、低内毒素水平且含细胞和保护成分，推荐使用。 3. 最优抗凝剂选择：EDTA、枸橼酸、肝素，其他抗凝剂也可使用，但会影响细胞活性。应 注意在血液稀释过程中去除抗凝剂体积。 4. 当血液样本粘度过高或血液样本大于等于3ml时，最优稀释方法：将血液于18-22℃以250g 离心10分钟，弃去血浆，补充添加全血及组织稀释液，添加量为所弃去血浆体积的1.5-2倍， 混匀备用。注：不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。 5. 实验操作时，不可使用含粉手套、不可使用内毒素含量过高的液体，手套中的粉末颗粒 及高内毒素会激活细胞从而降低细胞得率及活性。建议使用天津灏洋配套相关产品。 6. 本实验不可使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，其带有的静电作用将导致细胞 贴壁影响分离效果。 7. 吸取过多的白细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细 胞数量增加。 8. 吸取过多的白细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。 9. 如需进行细胞计数，则需血液贮藏时间不得多于 10 小时，否则将导致细胞被激活，得率 降低。 10. 为去除所混杂的血小板，可在分离液上层加上 4-20%蔗糖梯度等渗溶液进行二次离心。 11. 细胞纯度可在步骤 10 后使用瑞氏染色方法确定，细胞活性可用台盼蓝处理后观察。 操作步骤: 情况 A: 血液样本小于 3ml 时，实验方法如下： 1. 取一支15ml离心管，加入3ml分离液置于18-22℃。 2. 将血液样本小心加于分离液之液面上。18-22℃，400g离心20分钟。低温（如4度）离心 会降低细胞得率。 3. 离心后，用吸管小心吸出分离液上层（包含白细胞的细胞层）0.5cm以上的上清液部分， 弃去。 4. 用吸管小心吸取分离液层、白细胞层及红细胞层置于另一新离心管内。 5. 在步骤4中所得离心管中加入10ml细胞洗涤液混匀。 6. 250g离心10分钟。 7. 弃上清，沉淀使用红细胞裂解液裂解红细胞。 7.1. 一倍体积的新鲜全血，加入