菲急性毒理实验和腐植酸吸附转化菲能力测定实验实施方案.docVIP

PAGE  PAGE 12 菲急性毒理实验和腐植酸吸附转化菲的能力测定实验实施方案 实验目的： = 1 \* GB3 ①做毕业论文正式的攻毒和解毒实验； = 2 \* GB3 ②探索菲的致毒机理；③依据毒理实验得出2周菲半数致死剂量，探索腐植酸对其最佳解毒浓度及机理。 实验地点：623室 实验时间：15d 实验用鱼：出膜5d——30d的海水青鳉仔稚鱼。挑选健康、活跃、较一致者，数量为1200*33+3200=42800尾。（注：1个空白对照组和10个实验组，共11组） 实验用品： 1、养殖用品：66个6L养殖槽（其中33个用于实验，33个用来替换、消毒用），400L养殖桶1个，盛放毒液的15L水桶10个，吸管若干； 2、仪器设备：烧杯，容量瓶，玻璃棒，移液枪，样品瓶，试剂瓶，分析天平，样品袋，口罩，一次性手套； 3、实验试剂：菲，丙酮，腐植酸，蒸馏水，海水。 4、其他：养殖记录本，仔鱼死亡量统计表格，标签纸和胶带等。 实验步骤： 一、攻毒和解毒实验设计及溶液配制：实验分11组进行，每组3个平行(各组Phe、腐植酸浓度如下表，其他条件如温度、操作、换水等均同)。 组别菲的浓度（μg/L）腐植酸浓度(mg C/L)G000G12500G25000G37500G410000G512500G67505G775010G875015G975020G1075025 重申规则： 为防止差错，每次配溶液前，务必先计算、记录、核对、再配母液与稀释、分到各组（桶、槽）。而且务必2人同时操作，一人为主，一人为辅兼校对，二人同时在实验记录本上签名对该操作负责！ （一）母液的配制： 1、菲母液的配制：丙酮作为溶剂，菲为溶质，配制成浓度为0.8g/L的母液。[雷欢，黄栩，田蕴等. 一株菲降解细菌的筛选及其降解条件的优化[J]. 海洋科学集刊，2008，49: 104-111.]。若需要配置10mL母液，则需要称取菲粉末0.008g，溶于10ml丙酮中。先用少量丙酮(1-2mL)将菲溶解在小烧杯中，然后用玻璃棒引流将烧杯中的溶液转移到10mL容量瓶中，用丙酮清洗烧杯3-4次(每次1mL)，清洗液用玻璃棒引流转移到之前的10mL容量瓶中，并不时用玻璃棒搅拌均匀，然后用吸管吸取丙酮将玻璃棒冲洗干净，最后用吸管定容到10mL，充分搅拌和摇匀。 2、不同浓度的腐植酸溶液的计算： 我们采用的（酒精下脚料制备的）腐植酸百分含量为11.79%，即1g中腐植酸的含量为11.79mg。（分析方法见万攸红. 容量法测定腐植酸的含量. 有色金属分析通讯,2001, 113:9-11.详见附件）；腐植酸中的碳含量为100g/L（分析方法见冯苍旭. 光谱法快速测定腐植酸C含量.中国地质,2010,37(3):831-834。详见附件）。用不同体积的液体腐植酸原液稀释可得不同浓度的毎升腐植酸浓度【计算备用，不配制溶液】： 5 mg C/L腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加0.05ml腐植酸； 10 mg C/L腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加0.1ml腐植酸； 15 mg C/L腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加0.15ml腐植酸； 20 mg C/L腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加0.20ml腐植酸； 25 mg C/L腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加0.25ml腐植酸。 3、母液的存放：一次可配制数毫升，并标记清楚，配好后存放于4℃的冰箱中以备后用。存放时，应注意与其他试剂的隔离，防止交叉污染。 （二）暴露液（Phe溶液+特定浓度的腐植酸）的配制：坚持逐级稀释原则[Chen HYPERLINK /science/article/pii/S0025326\l aff1#aff1 \o Affiliation: a a P J, Su HYPERLINK /science/article/pii/S0025326\l aff1#aff1 \o Affiliation: a a C H, Tseng HYPERLINK /science/article/pii/S0025326\l aff1#aff1 \o Affiliation: a a C Y, et al. Toxicity assessments of nanoscale zerovalent iron and its oxidation products in medaka (Oryzias latipes) fish.  HYPERLINK /science/journal/0025326X \o Go