一株高效褐藻酸降解菌的筛选、鉴定及其发酵条件的优化.pdfVIP

一株高效褐藻酸降解菌的筛选、鉴定及其发酵条件的优化 侯士昌1, 温少红1, 唐志红1, 崔玉琳2, 秦 松2 (1. 烟台大学 生命科学学院, 山东 烟台 264003; 2. 中国科学院 烟台海岸带研究所, 山东 烟台 264003) 摘要: 以褐藻酸钠为唯一碳源, 从腐烂海带中筛选得到褐藻酸钠降解能力较强的菌株 H4, 经生理生 化和 16S rDNA 序列分析鉴定该菌株属于交替单胞菌属(Alteromonas)。对 菌 株 H4 的发酵条件优化研究 表明, H4 的较优培养基组成为(w/v): 褐藻酸钠 0.6%、酵母粉 0.5%、蛋白胨 0.25%、NaCl 3%; 较优培 养条件为: 培养温度 28℃, 初始 pH7.5, 接种量 1.5%(v/v), 培养时间 48 h。Fe3+对交替单胞菌 H4 的产 酶有明显的促进作用, 这在其他褐藻酸裂解酶生产菌株中未见报道, 而 Cu2+对褐藻酸裂解酶的抑制作 用高达 45.78%。在优化后的培养条件下, 粗酶液酶活达到 146.45 U/mL, 较优化前提高了 39.4%。 关键词: 褐藻酸钠降解菌; 筛选; 鉴定; 酶活优化 中图分类号: Q935 文献标识码: A 文章编号: 1000-3096(2014)07-0020-07 doi: 10.11759/hykx20130722001 褐藻酸主要存在于褐藻的细胞壁和细胞间质, 生理生化和种属鉴定, 通过研究影响 H4 酶活的培养 是一种高聚合度的多糖类物质, 在褐藻中的含量 基组成和培养条件, 优化其发酵产酶过程, 以期为 24%~31%, 由苏格兰化学家 Stanford 在研究大型藻 褐藻酸寡糖的规模化生产和应用奠定基础。 类 Ascophyllum 时首次发现。褐藻酸大部分来源于 1 材料与方法? Macrocystis、Laminaria 和 Ascophyllum 3 个属[1], 是 由β-D-1,4-甘露糖醛酸(简称 M)和?-L-1,4-古罗糖醛 1.1 培养基 酸(简称 G)两种单体以 C-1,4 糖苷键非均聚形成的线 (1) 种子培养基: 酵母提取物 5 g/L, 蛋白胨 [2] 性分子 。近年来随着海洋活性物质的蓬勃发展, 褐 10 g/L, NaCl 10 g/L。 藻酸的研究日益受到重视。 (2) 初筛培养基: (NH4)2SO4 5 g/L, K2HPO4 2 g/L, ,褐藻酸具有黏度高和稳定性好的特点, 常作为增 NaCl 30 g/L, MgSO4 ? 7H2O 1g/L, FeSO4 ? 7H2O 0.01 g/L 稠剂、粘合剂和上浆剂等在食品、化工和纺织等领域 褐藻酸钠 5g/L, pH 7.5。 广泛应用。但是随着分子生物学和医学的发展发现, (3) 发酵培养基: 蛋白胨 5g/L, 酵母提取物 1g/L, 褐藻酸降解后得到的寡糖呈现出多种生物活性, 在医 褐藻酸钠 5g/L, NaCl 30g/L, pH 7.5。 药、农业、化工等领域引起了世人的瞩目, 具有诱导 1.2 种