2015-2016学年浙科版选修一分离以尿素为氮源的微生物学案.docxVIP

实验二 分离以尿素为氮源的微生物学案 导学诱思 【实验原理】利用选择培养基筛选尿素分解菌【土样的获得】 在有哺乳动物排泄物的地方取得【实验步骤】INCLUDEPICTURE /security/b494e1c0c007da13e819dfb98dd90a72/4cccce79/ett20/resource/d068633c285df6026a67a869b6f491d3/tbjx.files/image003.gif 一、以尿素为氮源的微生物 1．尿素：又称________，是________的产物。在人和其他哺乳动物如家畜的________中都含有尿素，大量尿素的存在对环境造成污染。 2．以尿素为氮源的微生物： 这些细菌可以尿素为氮源，是因为其含有________，通过________尿素作为其生长的氮源。其利用尿素的方程为： 3．分离以尿素为氮源的微生物所依据的原理：在氮源只有尿素时，这些微生物能利用尿素获得氮源而存活；而其他微生物却不能利用尿素，最终因为缺乏氮源而死亡。 答案：1.脲　蛋白质降解　尿 2???脲酶　降解　 二、从土壤中分离出以尿素为氮源的微生物实验 1．实验目的： (1)使用________的培养基(含有尿素)分离________的细菌(含有脲酶的细菌)。 (2)使用____________检知酶(脲酶)所催化的反应。 2．实验内容： (1)从________中________能利用尿素的细菌。 (2)观察________。 3．实验步骤： (1)采用倒平板技术，在超净台上的________旁制得固体平面________培养基与________培养基； (2)制备细菌悬浮液： 将________1 g，在________条件下加到________mL无菌水的三角瓶中，振荡________min，制成________稀释液；从该稀释液中取________mL悬液加到________mL无菌水的三角瓶中，经振荡就制成________稀释液；再从该稀释液中取________mL悬液加到________mL无菌水的三角瓶中，经振荡就制成________稀释液；依此法可依次制备出10－5、10－6……土壤稀释液。 (3)用________法分离细菌： 取________mL稀释10－4和10－5的________，分别加到有________培养基和________培养基的培养皿中，再将保存在______中的玻璃刮刀放在________上灼烧，待________后，在______旁打开培养皿，将菌液涂布到________上。 (4)培养：将培养皿________，在________℃恒温箱中培养________h。 (5)观察、计数菌落。 培养基细菌悬浮液稀释度______________________固体培养基INCLUDEPICTUREM06.EPSINCLUDEPICTUREM07.EPS______固体培养基INCLUDEPICTUREM08.EPSINCLUDEPICTUREM09.EPS答案：1.(1)专一　专一　(2)指示剂颜色的变化 2．(1)土壤　分离出　(2)菌落数 3．(1)酒精灯　LB全营养　尿素　(2)土样　无菌　99　10　10－2　0.5　4.5　10－3　0.5　4.5　10－4　(3)涂布　0.1　土壤稀释液　LB　尿素　70%酒精　酒精灯火焰　刮刀上火焰熄灭　酒精灯火焰　整个平面　(4)倒置　37　24～48　(5)10－4　10－5　LB全营养　尿素 核心解读HEXINJIEDU 1．尿素在自然界中氮循环有怎样的关系？ 自然界中的氮循环在保持生态稳态上有重要的作用，具体过程可参看下图。 INCLUDEPICTUREM10.EPS 自然界中的氮循环 如果土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下就会被水解，水解后的NH3会使土壤变成碱性，NH3与其他阴离子物质如SOeq \o\al(2－,4)、COeq \o\al(2－,3)、NOeq \o\al(－,3)等形成化合物，则会使土壤板结。有脲酶的细菌使植物废弃物和动物尸体降解，并利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。 2．为什么本实验中要用琼脂糖来代替琼脂配制固体培养基呢？琼脂糖与琼脂有何区别？ 琼脂在制作固体培养基时起凝固剂的作用。但它却是一种未被纯化的混合物，里面有一定量的含氮化合物。在本实验中所使用的尿素培养基却要求提供氮元素的物质只有尿素，用这种培养基才能分离得到含脲酶的细菌。若用琼脂来制备本实验的尿素固体培养基，则提供氮元素的物质除了尿素还有琼脂，用这种培养基就不难只得到含脲酶的细菌，还会得到大量以非尿素为氮源的细菌，这样就达不到分