用于抗癌載藥系统的自组装脂质体聚合物复合微球.doc

用于抗癌载药系统的自组装脂质体聚合物复合微球 摘要：通过多种物质的连续吸附得到的聚电解质多分子层对于像抗癌药物这种小分子的运载是非常有用的。在本研究中，层层自组装（LbL）纳米结构通过以下方法制得：将天然壳聚糖和透明质酸自然沉积到带负电的固态混合脂质体纳米微球（SLNs）上。阿霉素/葡聚糖硫酸酯的复合物被包在SLNs中。这使得球形纳米微粒的直径在265nm左右，Zeta电位大约为-12mV。纳米微球较为稳定，且表现出阿霉素（DOX）的可控释放。进一步的药代动力学研究表明，相比单纯的DOX以及未经修饰的载DOX-SLNs，LBL功能化SLNs明显提高了循环半衰期，并降低了药物的消除率。综上，结果表明这种具有pH响应外壳和分子靶向性的新型LBL修饰系统，有着作为肿瘤靶向性的药物释放载体的潜质。 简介 固体脂质纳米粒（SLNs）因其能够运载亲水和疏水治疗药物的特性而受到广泛关注。SLNs是结???了聚合物胶体和脂质体微粒优点的胶体载体。它们拥有极好的生物相容性，延展性和稳定性，有着高载药率。然而，SLNs的使用总是和突释以及体内的过早释放联系在一起，主要是因为微粒总是倾向于结晶，使得药物从内核中释放出来。此外，通过网状内皮组织（RES）的活动，SLN基结构会很迅速的从内循环中除去。如果想用这类纳米微粒有效的运输抗肿瘤药物，那么通过制备出一种简单定制，经过表面修饰的控释运载系统来克服这些缺点是相当有必要的。 一种表现出良好性质的新系统是利用带有相反电荷的聚合物层层自装载（LBL）形成的多层聚电解质（PEM）涂层。这种聚电解质自沉积的方法作为功能化微粒表面或制备核-壳结构微粒的新方法。PEM在药物运载领域中可以运用于许多治疗方法中。越来越多的证据表明，LBL结构能够延长血液循环，并且对肿瘤间隙的被动扩散和渗透有促进作用。另外，因为层状材料本身的靶向性质，这些结构的肿瘤靶向能力也得到了提升。这种核-壳微球的另一个关键优点包括粒径，高载药率，可控药物释放，以及也许最重要的，可调节的较长的体内血液循环。 到现在为止，有关LBL薄膜在载药和体内肿瘤区域靶向性的应用的检测的研究还很少。而且，现在还没有研究是有关能否得到带电高分子在载药和混合SLNs上自然沉积的。在本研究中，我们使用LBL技术来制备稳定的核-壳微粒，使我们能够结合SLNs和PEM的优点。我们设计了三种运载体系：载阿霉素SLN（DOX-SLNs），载阿霉素/葡聚糖硫酸盐混合SLN（DOX/DS-SLNs），LBL覆盖DOX/DS-SLNs（LBL-DOX/DS-SLNs）。天然壳聚糖（CS）和透明质酸（HA）作为一对天然可降解生物高分子，有着很好的生物相容性和生物可降解性，可以作为LBL结构中的层状覆盖材料。为了研究载药系统的适宜制备方法，我们评估了理化参数，并进行了体外释放实验，细胞毒性实验和一些药代动力学实验。 材料及方法 材料 LBL修饰SLNs的制备 SLNs用热均一法进行制备。通过对脂质体和表面活性剂电位的分析，我们认为Compriol 888 ATO，卵磷脂和吐温-80是最适合SLN制备的。简单地说，300mg的Compriol 888 ATO和30mg卵磷脂在10℃下熔化，这个温度高于脂质体的熔点，以保持透明的溶液。水相的表面活性剂是将200μL的吐温-80溶于10ml蒸馏水中，然后加热到油相的温度。加热的水相加入到油相中并使用Ultra-Turrax?T-25均质机分散均匀（13500rpm，3min）。得到的粗状乳液使用探头超声仪超声乳化（90%振幅，3min）。通过冰浴降温热的纳米乳液得到SLNs。DOX-SLNs是通过加入10%w/w的药物在油相中得到的。 DOX/DS-SLNs是通过相似的方法制得的，但有些细微的改变。DOX在DS溶液中低速（200rpm/min）搅拌2h孵育。同时将这部分水相（加热到60℃）和水相表面活性剂加入油相中。其他的步骤与上段描述的过程相同。DOX/DS复合物分散在SLN内核中。 为了制备层层自组装DOX/DS-SLNs，我们用不同体积比的带正电的CT溶液来包覆带负电的DOX/DS-SLN，然后将带负电的HA溶液加入带正电的CT-SLNs，轻微震荡混合物，孵育1h，制得LBL-DOX/DS-SLNs。（图1） 粒径，Zeta电位和多分散性的测量 我们使用动态光散射法来测定粒径，多分散系数（PDI）和ζ电位。通过使用Nano-S90Sizer，我们在固定衍射角为90°进行测量。用蒸馏水讲SLN分散液进行适当稀释（比原浓度小50倍，大约为500μg/ml），然后再25℃测量。水相动力学粒径通过Stokes-Einstein方程确定。ζ电位和PDI使用由制造商提供的Nano DTS软件（6.34坂本）确定。每个样都经过三组测定，每组十次。