油菜内生真菌的分离鉴定及抑菌作用.pdfVIP

第 3O卷 第 3期 2011年 6月 华 中 农 业 大 学 学 报 Journal of Huazhong Agricultural University V0l_30 No．3 June 2011，270~275 油菜内生真菌的分离鉴定及抑菌作用 兰 楠 祁高富 喻子牛 赵秀云 华中农业大学生命科学技术学院／农业微生物学国家重点实验室，武汉 430070 摘要 从油菜幼苗中通过 PDA培养基分离出 9株内生真菌，通过形态观察和 18S rRNA基因序列分析，其 中6株鉴定为链格孢菌(Alternaria alternata)，1株鉴定为球毛壳菌(Chaetomium globosum)，1株属于镰刀菌属 (Fusarium)，1株属于炭角菌 目(Xylariales)。从鉴定出的油菜内生真菌中，筛选出 1株有抑菌活性的生防真 菌——球毛壳菌(Chaetomium globosum)YY-11，此菌株对油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、立枯丝核菌 (Rhizoctonia solani)、油菜灰霉病菌(Botrytis cinerea)、小麦赤霉菌(Fusariumgraminearum)等有不同程度的抑 制作用。球毛壳菌 YY-11对立枯丝核菌的玻片对峙镜检结果显示 ：在对立枯丝核菌的抑制过程中，球毛壳的拮 抗机理主要是重寄生作用。 关键词 内生真菌；18S rRNA；球毛壳菌；抑菌作用 中图分类号 Q 933-331；S 432．4 4 文献标识码 A 文章编号 1OOO一2421(2011)O3—027O—O6 植物内生真菌(plant endophytic fungi)是指在 植物寄主中度过全部或近乎全部生活周期而不使寄 主表现任何症状的一类真菌，几乎存在于已知的任 何植物中[1]。内生真菌因其长期生活在植物体内的 特殊环境中，并且与宿主协同进化，在演化的过程中 二者形成了互惠共生关系：一方面植物为内生真菌 提供光合产物和矿物质；另一方面内生真菌的代谢 物能刺激植物生长发育，提高寄主植物对生物和非 生物胁迫的抵抗能力，以其 自身代谢活动等机制抑 制植物病原菌的生长[2]。虽然从第 1株植物内生真 菌的发现至今已有 100多年的历史[3]，但是对其开 展真正系统的研究始于 2O世纪 8O年代，现在已经 从对内生真菌种群资源多样性的调查扩展到与宿主 植物共生关系的研究中，同时，对内生真菌自身功能 及其在农业和药物学领域的应用也正逐步成为研究 热点。 传统的真菌菌种鉴定方法主要是以形态学为依 据，即通过培养后观察菌落形态、孢子形态和个体显 微特征对菌种进行鉴定。然而真菌的形态特征复 杂，且有少数种类形态特征和生理生化指标会随着 环境的变化而变化，因此，传统的真菌分类时常会引 起分歧[4]。随着现代生物学技术的发展，将分子生 物学鉴定方法引入真菌的现代分类学中是真菌分类 学自身发展的客观要求，这种鉴定方法比传统的形 态学鉴定更为快速、准确和可靠[5]。 目前，18S rDNA是研究真菌高等分类群(属以 上)的系统演化中最常选用的区段，对于真菌的系统 演化的研究具有非常重要的意义。到目前为止，很 多生物(包括真菌)的 18S rRNA基因的完整序列都 已被获知，人们可以根据已知序列进行遗传演化分 析从而获得目标真菌在生物界的演化关系。白逢彦 等L6]通过小亚基 rDNA(SSU rDNA)全序列的分子 系统学分析，将 1株从水稻茎秆上分离的酵母菌鉴 定为大和本森顿酵母 (Bensingtonia yamatoana)。 Chambers等L7]对 1种从 Woolsia pungens上分离 的石楠型内生菌根真菌的rDNA ITS区进行序列分 析，通过与已知序列同源性比对分析完成了对该真 菌的鉴定。 本研究将传统的形态学鉴定和现代分子生物学 鉴定方法相结合，对从油菜中分离出的 9株内生真 菌进行菌种鉴定，并构建系统发育树。同时，对其中 1株潜在生防菌球毛壳菌(Chaetomium globosum) 收稿日期 ：2010—04—07 基金项目：国家“863”计划项目(2006AA10A210) 兰 楠，硕士研究生．研究方向：微生物生物防治．E-mail：orchid— le@yahoo．cn 通讯作者：赵秀云，博士，副教授．研究方向：微生物代谢和微生物农药．E-mail：xiuyunzh@mail．hzau．edu．cn 第 3期 兰 楠 等：油菜内生真菌的分离鉴定及抑菌作用 271 的抑菌作用进行了初步研究。 1 材料与方法 1．1 样品采集及菌株分离 采集华中农业大学试验田中甘蓝型油菜(Bras— sica napus L．)华油杂 4号幼苗作为试验材料，用塑 料薄膜