幽门螺杆菌cag7-n基因克隆表达及其重组蛋白对BGC-823细胞生物学的影响.pdfVIP

第 15卷 第 4期 2014年 8月 北华大学学报(自然科学版) JOURNAL OF BEIHUA UNIVERSITY(Natural Science) V01．15 No．4 Aug．2014 文章编号：1009·4822(2014)04—0463-05 DOI：10．11713／j．issn．1009—4822．2014．04．009 幽门螺杆菌 cag7-n基因克隆表达 及其重组蛋白对 BGC一823细胞生物学的影响 周海星 ，母润红 (1．北华大学基础医学院，吉林 吉林 132013；2．吉林市肿瘤医院，吉林 吉林 132002) 摘要：目的 研究克隆幽门螺杆 菌(Helicobacter pylori)cag7一n基因对 BGC一823细胞增殖和 IL一8分泌的影 响． 方法 采用 PCR技术从 H．pylori基因组 DNA中扩增 cag7-n基因片段 ，构建重组质粒 pET一28a—cast—n，转化大肠 杆菌 BL21，经 Western blot鉴定 ，纯化的蛋 白作用于 BGC一823细胞，用 MTY法检测蛋 白对细胞增殖的影响． 结果 成功克隆cag7一n基因，经镍柱纯化后可获得纯度为98％的重组蛋白．纯化蛋白浓度在100，150，200 mL 时，培养时间延长，细胞的增殖受到抑制；在相同的培养时间，细胞的增殖程度随蛋白浓度的增加而降低． 结论 成功克隆了cag7一n基因，并在大肠杆菌BL21中表达，经过镍柱纯化后得到纯度较高的蛋白，纯化透析后 的蛋白与 BGC-823细胞共培养，可诱导细胞因子IL一8在mRNA水平上的表达及其对BGC一823细胞增殖的影响． 关键词：幽门螺杆菌；cag7．n基因；克隆；增殖 中图分类号：Q933 文献标志码：A Cloning Expression of Helicobacter pylori cag7-n and the Influence of Its Recombinant Protein on BGC一823 Cytobiology Zhou Haixing l_，Mu Runhong ( ．Basic Medical Colege ofBeihua University，Jilin 132013，China；2．filin City Tumor Hospital，Jilin 132002，China) Abstract：Objective To study the influence of Helicobacter pylori，cag7-n genes cloning on BGC一823 cel proliferation and IL-8 secretion．M ethod PCR technology is used to amplify cag7一n gene segment from DNA of Hpylori genome，to construct recombinant plasmid pET-28a-cag7一n and to transform Escherichia coli BI21．By means of Western blot，the purifed protein acts on BGC-823 cel1．Then MqT method is used to detect the effects of the protein on the cell proliferation．Result The cag7-n is cloned successfully SO that the recombinant protein with 98％ purity after purification by Ni column．When the purified protein concentration is 100，150，200 g／mL，the culture time iS prolonged and the cell proliferation iS inhibited．With the same culture time．the cell proliferation degree reduces as the protein concentration increases．Conclusion The cag7一n gene is successfully cloned and expressed in Eschenchia coli BL21．Protein with high purity is obtained by means of nickle colnum purification