赤霉素产生菌原生质体制备、纯化与再生工艺的研究.pdfVIP

???? 中国抗生素杂志????年?月第??卷第?期? 文章编号 ：????—????????????—????．??? 赤霉素产生菌原生质体 制备 、纯化与再生工 艺的研 究? 张 文 宣 赵 南 朱江 萍? ?江西新瑞丰生化有限公司，新干 ???????? 摘要： 目的 对赤霉素产生菌原生质体进行制备、纯化 、再 生工 艺改进与完善 。方法 本文通过微孔滤膜作载体 ，在含甘? 氨酸 的菌丝生长培养基 固体平板 上，培养 取得 幼嫩 菌丝体，并对原生质体制备 时的复合破壁 酶液组分配 比、酶解时 间，原生质? 体纯化再生工艺进行 了改进和完善。结果? 实验证明：①在 幼嫩菌丝体 的制备过程 中，采用微孔滤膜平板法培养幼嫩菌 丝体 ，? 易于控制菌龄 ，生长在微孔 滤膜 上的菌丝体不混杂有多余的培养基成份 ，不必经洗涤 ，可直 接酶解，简化 了实验步骤 ；②在 原? 生质 体制备过程 中，采 用 以纤维素酶?％?蜗牛 酶?％?果胶 酶?．?％作 为复合破壁酶液 的组成 ，可使 原生质体 的释 放量从 ???升 至? ???；③在原生质体纯化过程中，采用 先慢速 离心沉 淀，后洗涤滤 除菌 丝断片的操作方法 ，可使无壁娇嫩 易碎 的原生质体 可依附? 菌丝 断片作缓冲载 体一起沉 淀，有??于纯化收集到完整 的原生质体 ，提高 原生质体 的活性再生；④在原生质体再生过程 中，选? 用含有聚胨 、酵母膏成份的??再生培养 基，可使 原生质体 的再生率达到 ??％以上。结论? 原生质体制备、纯化、再生工艺的改? 进与 完善 ，确 保了诱变 育种 基因突变后的遗传个体绝大部分都是纯合体 ，避免 了高产 性状经传代后水平回复 的现象 ，为赤霉 素? 理化诱变育种工作 的顺利开展创造了 良好条件。?