生防放线菌代谢产淀粉酶工艺的优化.pdfVIP

书李堆淑．生防放线菌代谢产淀粉酶工艺的优化［Ｊ］．江苏农业科学，２０１ ５，４３（８）：３７６ －３７８． ｄｏｉ：１ ０．１ ５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１ ００２ －１ ３０２．２０１ ５．０８．１ ２２ 生防放线菌代谢产淀粉酶工艺的优化 李堆淑 （商洛学院生物医药与食品工程学院，陕西商洛 ７２６０００） 　　摘要：从陕西省商洛市商州区不同植被下采取土样，分离出 ６５ 株生防放线菌，其中从苜蓿中分离的 ＭＸ３ 菌株对 黄芩根腐病菌的生防效果最强。采用单因素试验及正交试验对 ＭＸ３ 菌株代谢产物产淀粉酶活性进行测定，优化发酵 条件。结果表明：单因素试验得出ＭＸ３ 菌株的最佳碳源、氮源分别为玉米粉、酵母膏，最适装液量为 １ ２５ ｍＬ，最适温度 为 ２８ ℃，最适初始 ｐＨ 值为 ６．０，最适摇床转速为 １ ３０ ｒ／ｍｉｎ，最适发酵时间为 ６．５ ｄ。由正交试验得到 ＭＸ３ 菌株的最 佳发酵条件组合为装液量 １ ２５ ｍＬ、ｐＨ 值 ７．０、发酵时间 ５．５ ｄ、摇床转速 ２００ ｒ／ｍｉｎ。 　　关键词：生防放线菌；淀粉酶；发酵液；正交试验；发酵条件；优化 　　中图分类号：Ｑ９３９．９７ 　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１ ００２ －１ ３０２（２０１ ５）０８ －０３７６ －０３ 收稿日期：２０１ ４ －０８ －１ ６ 基金项目：陕西省教育厅科学研究专项计划（编号：２０１ ３ＪＫ０７３７）；商 洛学院科研基金（编号：１ ３ＳＫＹ －ＦＷＤＦ００２）。 作者简介：李堆淑（１ ９７７—），女，宁夏隆德人，硕士，副教授，主要从事 植物病理学及微生物学研究。Ｅ －ｍａｉｌ：ｌｄｓ１ ２０２＠１ ６３．ｃｏｍ。 　　生防放线菌，尤其是链霉菌属是药物研究的重要微生物 资源，也是微生物生长发育和代谢产物研究的良好材料［１ －２］。 放线菌的链霉菌属及其相关类群也用在植物病害的生物防治 方面，生防放线菌在寄主体外通过各种生物作用降低病原菌 侵染［３ －４］。Ｋｅｍｉｒａ 将从泥煤中分离的灰绿链霉菌作为制剂， 主要用于防治镰刀菌、腐霉菌、疫霉菌、丝核菌等土传病原 菌［５］。我国研制的细黄链霉菌“５４０６”不但能够防治多种植 物病原菌的生长，还对植物生长具有促进作用［６］，也可以在 寄主植物组织内诱发其产生抗性。淀粉酶对淀粉的水解作用 是生物体利用淀粉进行新陈代谢的初级反应，也是工业上产 量最大的酶制剂品种［７］。淀粉酶分布广泛，遍及微生物及高 等植物，其种类繁多，特点各异，用途较广，主要应用于发酵、 果汁、食品加工、医药、造纸、印染、洗涤剂、工业副产品、青贮 饲料及废料的处理等多种领域［８ －１ ０］。目前对细菌产淀粉酶 的研究较多，其中研究芽孢杆菌产淀粉酶［１ １ －１ ４］、放线菌产淀 粉酶的较少［１ ５］。生防放线菌的研究主要集中于抑菌 性［１ ６ －１ ７］，但对高抗菌、高产淀粉酶的放线菌研究未见报道。 因此，本研究从陕西省商洛市商州区苜蓿地采集土样，通过选 取培养基组成和培养条件等因素进行试验，以期获得生防放 线菌代谢产物产淀粉酶的最优发酵条件，不仅为研究生防放 线菌在不同条件下的高抗菌性作了铺垫，而且为开发新菌株 用于淀粉酶工业的研究提供依据。 １　材料与方法 １ ．１ 　材料 １ ．１ ．１ 　供试材料　从陕西省商洛市商州区不同植被模式下 采集土样，分离出 ６５ 株生防放线菌；从黄芩根部分离的黄芩 根腐病菌。 １ ．１ ．２　培养基　高氏 １ 号培养基（改良）：每 ３００ ｍＬ 培养基 中滴加 １ ｍＬ ５０ μｇ／ｍＬ Ｋ２Ｃｒ２Ｏ７；马铃薯培养基（ＰＤＡ）；种子 培养基；淀粉发酵培养基（１ ５０ ｍＬ 规格的三角瓶中装液量为 １ ２５ ｍＬ）。 １ ．２　试验方法 １ ．２．１　粗酶液淀粉酶活性测定　采用 ３，５ －二硝基水杨酸 显色法测定酶活性［１ ８］。在 ６０ ℃、ｐＨ 值 ＝６．０ 的条件下，１ ｈ 内 ２％的可溶性淀粉溶液中释放出 １ ｍｇ 葡萄糖的酶量定义 为 １ 个酶活性单位。 １ ．２．２　单因素试验对 ＭＸ３ 菌株发酵条件的优化　活化斜面 保存的 ＭＸ３ 菌株，接种到改良的高氏 １ 号培养基上，于 ２８ ℃ 恒温培养箱中培养 ５ ｄ 后，以 ４％的接种量接种培养 ５ ｄ 的种 子培养液；再将种子培养液以 １ ０％的接种量接种于发酵液 中，在 ２８ ℃、１ ３０ ｒ／ｍｉｎ 条件下培养 ５ ｄ 后，测定 ＭＸ３ 菌株发 酵液的淀粉酶活性。 主要单因素的设置为：（１ ）碳源：淀粉、玉米粉、牛肉膏、 碳酸钠、葡萄糖；（２）氮源：黄豆饼粉、硝酸钠、硫酸铵、蛋白 胨、酵母膏；（３）装液量：５０、７５、１ ００、１ ２５、１ ５０ ｍＬ；（４）温度： ２５、２８、３０、３５、３７ ℃；（５）初始 ｐＨ 值：６．０、７．