丰富环境对拟老年性痴呆大鼠学习记忆及神经元突触可塑性影响研究-4幻灯片1.pptVIP

丰富环境对拟老年性痴呆大鼠学习记忆及神经元突触可塑性影响研究; 研究背景; 丰富环境（EE）干预作为生活方式改变的一种形式，可促进脑损伤及神经变性疾病的恢复，包括外伤性颅脑损伤，癫痫持续状态，帕金森病等。; ; ;; 老年性痴呆最主要的病理改变是脑内胆碱能神经系统损伤及胆碱能神经元丢失，也是造成学习记忆能力下降的直接原因，因此本实验应用鹅膏蕈氨酸基底前脑注射，破坏模型动物脑内胆碱能神经系统，造成胆碱能神经元丢失，可模拟老年性痴呆; ;技术路线;研究方法;丰富环境模型参照文献加以改进，鼠笼规格为120cm×100cm×60cm，笼内设有金属制小桥和斜架、直径3cm隧道(聚氯乙烯树脂材料制成)、塑料跑笼、金属链条、各种形状及颜色的塑料玩具(球、盒、铃档等)和木制积木，每2-3d清洁并更换1次。笼内安装有L形隧道、塑料转轮、小球等玩具，每笼5只，持续时间为28 d。;;标准环境正常组、标准环境模型组大鼠饲养于普通鼠笼中，笼内有垫料。环境温度保持23-25?C，维持12 h照明、12 h黑暗的光照周期，实验动物自由进食、饮水。在丰富环境与正常环境条件下培养8周 ;2、 动物模型制作 将大鼠用10%水合氯醛麻醉，脑立体定位仪固定平颅头位，参照大鼠脑定位图谱,在前囟前(AP)0.8mm、中线旁开(ML)3.0mm处，距颅骨表面深度(DV)7.5mm双侧各注鹅膏蕈氨酸（购自sigma公司）1μl(10g/L溶于0.5 M PBS中)，标准环境对照组注射等量PBS;3 指标检测 3.1 采用物体识别实验（ORT）和物体位置实验(OLT)评价大鼠的非空间学习、记忆能力，两种测试任务没有任何刺激源，不会影响动物的自主活动 ;物体辨识实验（ORT）示意图;物体位置辨识实验（OLT）示意图;结果以辨识指数表示，越高即表示动物的学习记忆能力越好，反之学习记忆能力差。 辨识指数（DI）计算公式：DI = (Tn ? Tf) / (Tf + Tn) 其中Tn代表大鼠在识别期探索新物体的时间，Tf代表大鼠在识别期探索旧物体的时间。;3.2 海马突触形态可塑性检测 （1）电镜标本制备及观察 3%戊巴比妥麻醉→断头剥脑取海马→固定→丙酮梯度脱水→浸透→包埋→切片(厚600A0)→230??铜网捞片→3%柠檬酸铅+0.1%醋酸铀双重电子染色→观察突触Nv、Sv，S ;;（2）组织切片制备 麻醉→取左侧大脑半球→福尔马林固定→脱水→透明→石蜡包埋→切片 ;取脑：每组随机取7只大鼠麻醉，断头处死，在冰台上快速取出脑组织，分离出左侧大脑半球，将附着在脑组织上的脑膜剥离干净后，从前额开始冠状位将脑组织切成从前至后切成4部分;（3）免疫组织化学反应 滴加3%过氧化氢甲醇溶液，室温孵育10 min,PBS冲洗→加非免疫性动物血清，室温孵育30min→加突触素抗体，4C孵育24h,PBS冲洗→滴加第二抗体，室温孵育30min,PBS冲洗→加链亲和素—过氧化物酶溶液，室温孵育30 min,PBS洗3次→DAB显色3-10 min→贴片、常规脱水、透明→封片 ; 阴性对照组省去第一抗体，其余步骤相同。 在全自动图像分析系统测定海马突触素免疫反应物的光密度值(OD值)，同时在相同的光学条件下测定相应每张切片胼胝体OD值作背景，免疫反应物的OD值减去背景OD值得到校正OD值，即免疫反应物的光密度值; 预期目标; 研究进度;