分子生物学讲座-7幻灯片1.pptVIP

二、多肽链合成的起始;因子; 原核生物中每一个mRNA都具有其核糖体结合位点，它是位于AUG上游8-13个核苷酸处的一个短片段叫做SD序列。这段序列正好与30S小亚基中的16S rRNA3’端一部分序列互补，上述序列特征1974年由J.Shine和L.Dalgarno发现，故称为SD顺序。SD序列也叫做核糖体结合序列。;;核糖体30S小亚基附着于mRNA的起始信号部位，该结合反应是由起始因子3(IF3)介导的，另外有Mg2+的参与。故形成IF3-30S亚基-mRNA三元复合物。;在起始因子2(IF2)的作用下，甲酰蛋氨酸-起始型tRNA(fMet-tRNA Met)与mRNA分子中的起始密码子(AUG或GUG)相结合，即密码子与反密码子相互反应。同时IF3从三元复合物脱落，形成30S前起始复合物，即IF2-30S亚基-mRNA-fMet-tRNAMef复合物。此步需要能量和Mg2+参与。;50S亚基与上述的30S前起始复合物结合，同时IF2脱落，形成70S起始复合物，即30S亚基-mRNA-50S亚基-fMer-tRNA Met复合物。此时fMet-tRNA Met占据着50S亚基的肽酰位（P位或给位），而50S的氨基酰位（A位或受位）暂为空位。等待对应mRNA中第二个密码的相应氨基酰tRNA进入，从而进入延长阶段。 ;;真核生物蛋白质合成的起始： 真核细胞的蛋白质合成过程基本类似于原核细胞的蛋白质合成过程。其差别除参与蛋白质生物合成的核糖体结构、大小、组成和mRNA的结构等不同外，主要区别在真核细胞蛋白质合成的起始步骤。这一步骤涉及的起始因子至少达十多种，因此起始过程更为复杂些。;（1）需要特异的起始tRNA，即tRNAmetf ， 并且不需要N端甲酰化。已发现的真核起始因子（eukaryote Initiation factor, eIF）至少有10种。 （2）起始复合物形成在mRNA5’端AUG上游的帽子结构（除某些病毒mRNA外）。 （3）ATP水解为ADP供给mRNA结合所需要的能量。;三、肽链的延长;2、肽键形成（转肽） 在肽酰转移酶的催化下，将P位点上的tRNA所携带的起始型的甲酰蛋氨酸转移给A位上新进入的氨基酰-tRNA，即由P位上的氨基酸提供α-COOH基，与A位上的氨基酸的α-NH2基形成肽链。此后，在P位点上的tRNA成为无负载的tRNA，而A位上的tRNA负载的是二肽酰 tRNA。;3、脱落 即50S亚基P位上无负载的tRNA脱落。 4、移位 指在EF-G和GTP的作用下，核糖体沿mRNA链相对移动。每次移动相当于一个密码子的距离，使得下一个密码子能准确的定位于A位点处。与此同时，原来处于A位点上的二肽酰tRNA转移到P位点上，空出A位点，随后再进行下一循环，直到增长到必要的长度。;; 无论原核生物还是真核生物都有三种终止密码子UAG，UAA和UGA。没有一个tRNA能够与终止密码子作用，而是靠特殊的蛋白质因子促成终止作用。这类蛋白质因子叫做释放因子（release factor，RF）。 原核生物有三种释放因子：RF1，RF2，RF3。RF1识别UAA和UAG，RF2识别UAA和UGA。RF3的作用还不明确。真核生物中只有一种释放因子eRF，它可以识别三种终止密码子。; 不管原核生物还是真核生物，释放因子都作用于A位点，使转肽酶活性变为水解酶活性，将肽链从结合在核糖体上的tRNA的CCA末端上水解下来，然后mRNA与核糖体分离，最后一个tRNA脱落，核糖体在IF-3作用下，解离出大、小亚基。解离后的大小亚基又重新参加新的肽链的合成，循环往复，所以多肽链在核糖体上的合成过程又称核糖体循环。 ;五、多核糖体循环 上述只是单个核糖体的翻译过程，事实上在细胞内一条mRNA链上结合着多个核糖体，甚至可多到几百个。蛋白质开始合成时，第一个核糖体在mRNA的起始部位结合，引入第一个蛋氨酸，然后核糖体向mRNA的3’端移动一定距离后，第二个核糖体又在mRNA的起始部位结合，依次下去。两个核糖体之间有一定的长度间隔，每个核糖体都独立完成一条多肽链的合成，所以这种多核糖体可以在一条mRNA链上同时合成多条相同的多肽链，这就提高了翻译的效率 。;多聚核糖体的核糖体个数，与模板mRNA的长度有关，例如血红蛋白的mNRA编码区有450个核苷酸组成，长约150nm ，上面串连有5-6个核糖体形成多核糖体，而肌凝蛋白的mRNA由5400个核苷酸组成，它由60多个核糖体构成多核糖体完成多肽链的合成。 ;?影响蛋白质生物合成的物质非常多，它们可以作用于DNA复制和RNA转录，对蛋白质的生物合成起间接作用，本节主要讨论抑制蛋白质生物合成翻译过程的阻断剂。 ;一、抗生素类阻断剂 许多抗生素都是以