LPS诱导流产小鼠蜕膜组织TNFα及NFκB的表达的论文.docVIP

　　LPS诱导流产小鼠蜕膜组织TNFα及NFκB的表达的论文 【摘要】 比较正常妊娠与脂多糖(lps)诱导流产小鼠模型蜕膜组织肿瘤坏死因子α(tnfα)及核转录因子kppab(nfκb)的表达。方法：建立正常妊娠模型和lps诱导流产模型。采用sabc法测定两组模型孕鼠13d蜕膜组织tnfα和nfκb的表达水平。结果：lps诱导流产模型蜕膜组织tnfα和nfκb的表达明显高于正常妊娠模型(plt;0.01)。结论：nfκb异常表达可能是小鼠流产的重要因素。 【关键词】 蜕膜组织; 肿瘤坏死因子α(tnfα);核转录因子kppab(nfκb);流产;小鼠 近年研究表明,不明原因的自然流产与母体肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,tnfα)的表达水平升高有关[1,2]，tnfα能直接引起实验动物的胎盘出血。核转录因子kppab(nfκb)是一种快速反应的转录调节因子，几乎存在于所有细胞中，能调控许多趋化因子、粘附因子、生长因子等细胞因子(包括tnf??)的生成，是基因发挥作用必须通过的基因开关[3，4]。蜕膜组织是母体与胎儿直接接触的界面，蜕膜组织对胎儿的免疫耐受为维持妊娠所必需。本文通过比较正常妊娠与流产小鼠模型蜕膜组织tnfα和nfκb的表达水平，旨在探讨二者在流产中的意义与作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 动物 雌性(未经产)、雄性昆明小鼠各20只，10～12周龄，由长江大学实验动物中心提供。. 　　1.1.2 试剂与仪器 兔抗鼠nfκb多克隆抗体、兔抗鼠tnfα多克隆抗体、即用型链酶亲和素生物素过氧化物酶复合物(sabc)试剂盒、二氨基联苯胺(dab)显色试剂盒、枸橼酸盐抗原修复液(0.01mol/l，ph6.0)由武汉博士德公司提供。脂多糖(lps)为美国sigma公司产品。切片机(leica rm 2135，上海莱卡仪器有限公司)，光学显微镜(nikon eclipse e800, 日本nikon)，显微摄像系统(spot version3.5, diagnostic instruments inc, usa), 图像分析系统(imagepro plus version 5.0.2，media cyberntics inc, usa)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 建立小鼠模型及处理 小鼠常规饲养，自由采食饮水。日光照12h。经适应环境1周后，阴道涂片法进行发情鉴定。发情母鼠与公鼠1∶1合笼过夜，次日清晨检出阴栓者定为孕0d。将受孕雌性小鼠随机分为流产组和正常妊娠组，每组10只。流产组母鼠在孕7d尾静脉注入lps 0.1μg(0.2ml)。正常妊娠组母鼠注入磷酸缓冲液(pbs)0.2ml。于妊娠第13天处死孕鼠，取胎盘计算胚胎吸收率(r)以评价模型建立成功与否。r=[re/(re+f)]×100%，re为吸收胚胎数, f为存活胚胎数。吸收的胚胎个体小，颜色紫黑，出血坏死，有的已溶化为血团块;解剖镜下观察模糊一片，没有胎膜结构。存活胚胎个体较大，粉红色;镜下观察胎膜及胎儿轮廓清晰，透光度好，无出血，淤血现象。 　　1.2.2 标本处理 在孕第13天处死两组模型鼠，采集蜕膜组织(采集的组织均来自于吸收胚胎邻近的正常存活胚胎)。将蜕膜组织用生理盐水漂洗去掉血液后，用10 %中性甲醛固定24h，石蜡包埋,连续切片，每张厚约5μm。置60℃烤箱，72h烘干后备用。1.2.3 免疫组化sabc染色与观察 按常规程序操作，tnfα和nfκb一抗工作液的浓度分别为1∶100和1∶100, dab为显色剂。用已知的tnfα阳性slca切片和nfκb阳性切片作阳性对照，用pbs代一抗作为阴性对照。结果判定：细胞胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性细胞。按阳性细胞所占的百分比分为4级：阴性()表现为不着色;弱阳性()表现为浅黄色;中度阳性()表现为深黄色;强阳性()表现为棕黄色。 　　1.3 统计学处理 采用spss13.0系统软件包，计数资料组间比较采用χ2检验。plt;0.05为差异有统计学意义。 　　2 结 果 　　2.1 两组孕鼠的胚胎吸收率比较 lps诱导流产模型孕鼠的胚胎吸收率明显高于正常妊娠模型，两组比较差异有统计学意义(plt;0.01)。见表1。表1 两组孕鼠胚胎吸收率比较注：两组间比较，*plt;0.01。 　　2.2 tnfα的表达状况 tnfα主要表达于正常子宫内膜、流产子宫内膜的腺上皮细胞胞浆和胞膜。从表2可以看出，流产小鼠子宫内膜比正常妊娠小鼠子宫内膜的tnfα显著升高。 　　2.3 nfκb的表达状况 nfκb主要表达于正常子宫内膜(见第92页彩色图版ⅵ之图1)、流产子宫内膜(见第92页彩色