MMP9基因多态性与老年动脉僵硬度的相关性研究的论文.docVIP

　　MMP9基因多态性与老年动脉僵硬度的相关性研究的论文 【摘要】 目的 探讨老年动脉僵硬度与基质金属蛋白酶9(mmp9)基因多态性的相关性。方法 对437例老年人(年龄60～95岁)进行一般情况、实验室指标及臂踝脉搏波传导速度(bapmp9三种基因型的分布。结果 高bapmp9三种基因型中以c/c型作为比较基线，c/t型和t/t型的or分别为1.227(95%ci：0.793～1.899)和2.170(95%ci:1.184～3.976)。以c等位基因作为比较基线，t等位基因的or为1.550(95%ci:1.141～2.105)。经单因素非条件logistic回归分析后进行多因素非条件logistic回归分析，结果显示年龄、体重指数、收缩压、脉压、平均动脉压、吸烟、高密度脂蛋白(hdl)及mmp9 tt基因型为动脉僵硬度增加的危险因素。结论 老年动脉僵硬度与mmp9基因多态性密切相关，mmp9 基因1 562t等位基因可能是老年动脉僵硬增高的遗传基因标记之一。 【关键词】 老年;动脉僵硬度;基质金属蛋白酶9;基因多态性 基质金属蛋白酶9(mmp9) 是基质金属蛋白酶家族(mmps) 中明胶酶的一种，作为降解血管基底膜中ⅳ型胶原的主要酶类,与动脉僵硬度密切相关。.mmp9 c1 562t 是mmp9基因转录启动子上游1 562 bp处存在的c →t 的功能多态性,影响基因转录产生低活性(c/c)和高活性(c/t、t/t) 的启动子基因型。臂踝脉搏波传导速度(bapmp9 c1 562t 基因变异的功能多态性与血压正常者的动脉僵硬程度相关〔1〕。本研究应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(pcrrflp)技术，分析mmp9 c1 562t 基因多态性在山东地区老年人中的分布特点,探讨mmp9基因c1 562t多态性与老年动脉僵硬度的关系。 　　1 研究对象与方法 　　1.1 研究对象 选取山东地区老年人437例,年龄60～95岁。同一医师应用日本科林公司vp1000 动脉硬化测定仪测定受试者bapmp9基因c1562t多态性检测。dna抽提：采肘静脉血5 ml，edta 抗凝,采用低渗盐析法从白细胞中抽提基因组dna，核酸分析仪测定dna浓度，-80℃保存。pcr扩增：mmp9 c1 562t位点及其侧翼区：引物由博尚生物技术公司合成，上游引物5′gcc tgg cac ata gta ggc cc3′;下游引物5′ctt cct aga cag ccg gca tc3′。pcr总反应体系为10 ×buffer 3 μl，mgcl2(25 mmol/ l) 1.2 μl,dntp (各10 mmol/l) 0.6 μl,上下???引物各3 μl，dna 模板1 μl，taq dna 聚合酶〔(宝生物工程(大连)有限公司〕1 u，加双蒸水至总体积30 μl 。pcr 反应条件:94℃预变性5 min，94 ℃1 min、68℃ 1 min、72 ℃1 min 35个循环;最后72 ℃延伸5 min。取pcr产物8 μl，1.5%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,紫外分析仪检测pcr 产物特异性。 pcr产物的酶切分析：产物回收，纯化，取10 μl 纯化pcr产物，加限制性内切酶paeⅰ(由fermentas mbi 公司提供)10 u，10 ×buffer 3 μl，加双蒸水至总反应体系30 μl， 置于37℃温浴酶切2 h，2.5%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,紫外分析仪检测酶切产物基因型。对其中部分病例的pcr 扩增产物,进行切胶纯化,于abi 377 型全自动测 　　序仪上作dna序列测定,验证c1 562t位点碱基。等位基因频率= (2×纯合子数+ 杂合子数)/(2×受检人群) 。 　　1.3 统计学处理 所有统计资料均输入计算机，用spss11.5软件分析，计量资料采用x±s表示，计数资料用百分数表示。基因型和等位基因频率用基因计数法,等位基因频率比较及检验基因型频率与hardyi:体重指数;sbp：收缩压;dbp:舒张压;pp：脉压;map:平均动脉压;tc：总胆固醇;tg:甘油三酯;glu:血糖;hdlc：高密度脂蛋白胆固醇 　　与低bapmp9多态性 应用pcr技术成功扩增到长度为435 bp的特异性片段，经限制性内切酶pae ⅰ酶切后产生野生型435 bp(c/c)，杂合子435 bp、247 bp、188 bp(c/t)，纯合突变247 bp、188 bp(t/t)三种基因型，见图1。 　　图1 mmp9 pcr扩增产物及酶切产物电泳结果 　　2.3 基因测序验证mmp9基因位点 部分pcr产物纯化后测序结果见图2。mmp9 1562位c