四章 微生物的生理.pptVIP

第四章 微生物的生理;第一节 微生物的酶; 生物体的基本特征之一是它不断地进行新陈代谢，而新陈代谢是由为数众多的各式各样的化学反应所组成。这些反应通常不需要在实验室中所要求的高温、高压或强烈的酸碱等条件，而是在生物体温和的条件下就可很快地进行。例如，在体外条件下，用纯化学的方法使淀粉水解成葡萄糖或使蛋白质水解成氨基酸时，需加25℅的H2SO4，温度在100℃以上，经过20多个小时才能完成。但在生物体内，极其温和的条件下（体温37℃，接近中性pH）进行物质水解，则是很容易的事。又如绿色植物利用光能、水、二氧化碳和无机盐等简单物质，经过一系列变化合成复杂的糖、蛋白质、脂肪等物质。而动物又利用植物体中的物质，并经过错综复杂的分解和合成反应转化为自身的一部分，得以生长、活动、繁殖等。这些在生物体外是难以进行的，其主要原因就是由于生物体内含有一类特殊的催化剂，这就是“酶”。;早在几千年前，人类已开始利用微生物酶来制造食品和饮料。我国在4000多年前，就已经在酿酒、制酱、制饴等的过程中，不自觉地利用了酶的催化作用。 1738年，有人提出食物的消化不是磨碎，而是胃液在起作用的概念，对酶有了初步的认识。随后对酶的认识不断加深； 1877年，Kuhne首次提出Enzyme一词。 1897年，Buchner兄弟用不含细胞的酵母提取液，实现了发酵。 1926年Summer第一次分离脲酶并获得其结晶； 1949年日本采用深层培养法生产细菌–淀粉酶，标志着现代酶的开始。;1982年，Cech首次发现RNA也具有酶的催化活性，提出核酶(ribozyme)的概念。 1995年，Jack W.Szostak研究室首先报道了具有DNA连接酶活性DNA片段，称为脱氧核酶(deoxyribozyme)。 目前已知的酶超过4000种.;酶的概念：生物催化剂。细胞中自己制成，基本成分是蛋白质。;二、酶的结构与功能的关系(一)酶蛋白的结构; 在一级结构上可能相距遥远，但在空间结构上彼此靠近，组成具有特定空间结构的区域，与酶催化作用直接有关的部位称为酶的活性中心。;活性中心内的必需基团;三、酶的分类 （一）按照酶所催化的的化学反应，分为六大类：;六大类酶;胞内酶:在细胞内部???作用，催化细胞的合成和呼吸 胞外酶 :能透过细胞，作用于细胞外的物质（大分子）;酶与一般催化剂的共同点 在反应前后没有质和量的变化； 只能催化热力学允许的化学反应； 只能加速可逆反应的进程，而不改变反应的平衡点。;绝对专一性;锁-钥学说——刚性模式;高效性 催化效率比普通催化剂高出107～1013倍，如 1克结晶的α—淀粉酶，在65℃时，15分钟可使2吨淀粉水解为糊精。 酶和一般催化剂加速反应的机理都是降低反应的活化能(activation energy)。酶比一般催化剂更有效地降低反应的活化能。 ;反应总能量改变 ; 对环境敏感 反应条件温和 催化活性受调节控制 ;五、酶促反应动力学 Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction ;1、酶促反应模式--中间产物学说: 1913年前后Michaelis和Menten提出酶促反应动力学的基本原理 ;V =Vmax[S]/（[S]+Km）; 2）Km可表示酶与底物的亲和力。 Km越小，酶与底物的亲和力越大。 同一种酶有几种底物就有几个Km，其中Km最小的底物一般称为该酶的天然底物或最适底物。 如：己糖激酶对葡萄糖的Km 1.5mmol/L 对果糖的Km 28mmol/L 所以葡萄糖为最适底物; 常用双倒数作图法：即取米氏方程式的倒数形式后可作出一直线。 ;3.影响酶促反应（酶活力）的因素有：;1)酶的总浓度E; 在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速度的影响呈矩形双曲线关系。;;;当底物浓度高达一定程度;3） 温度;4） pH对酶反应速度的影响;胃蛋白酶;5）激活剂对反应速度的影响;6）抑制剂对酶反应速度的影响; 抑制作用的类型;(一) 不可逆性抑制作用;（二） 可逆性抑制作用;竞争性抑制作用;特点： ⑴ 竞争性I往往是酶的底物结构类似物； ⑵ 抑制剂与酶的结合部位与底物与酶的结合部位相同—— 酶的活性中心 ⑶ 抑制作用可以被高浓度的底物减低以致消除；; 非竞争性抑制;非竞争性抑制的特点： ⑴ 非竞争性抑制剂的化学结构不一定与底物的分子结构类似； ⑵ 抑制剂与酶的活性中心外的位点结合； ⑶ 抑制剂对酶与底物的结合无影响，故底物浓度的改变对抑制程度无影响； 抑制程度取决于抑制剂的浓度 ;竞争