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细胞遗传学实验;王苏玲 E-mail: slwang@njau.edu.cn O-Tel:（理科楼A320）;曹爱忠 E-mail: caoaz@njau.edu.cn O-Tel:（理科楼A318）;实验一 植物有丝分裂 实验目的 1）学习植物材料的固定方法和常规压片方法 2）观察有丝分裂过程中染色体的变化 3）掌握染色体形态观察和计数方法; 植物细胞有丝分裂是植物细胞增殖的主要方式，只要能进行细胞分裂的植物组织或单个细胞都可以作为观察染色体的材料。如植物的顶端分生组织（根尖和茎尖）、居间分生组织（禾本科植物的幼茎及叶壳）、愈伤组织和胚乳、萌发的花粉管等。 适时取材、固定、离析、染色，制成标本，利用显微镜对有丝分裂过程中染色体进行观察，对物种亲缘关系鉴定、杂种分析等工作中具有广泛的用途。;染色体是核中重要和稳定的成分，具有特定形态结构和自我复制能力,并且积极参与代谢活动，出现连续而有规律性的变化。 染色体控制生物的遗传性状，它在形态、数目、结构上的变化，也会导致遗传性状的相应变化。;染色体核型;细胞周期（cell cycle） G1期 S期 间期（interphase） 细胞周期 G2期 前期 (prophase) M 期 中期 (metaphase) 后期 (anaphase) 末期 (telophase) ;一般S 期时间较长，且较稳定；G1 和G2 的时间较短，变化也较大。 因物种、细胞种类和生理状态的不同而异。 哺乳动物离体培养细胞的有丝分裂周期,G1为10小时，S为9小时,G2为4小时，间期共长23小时。 而细胞分裂期M 全长只有1小时。 ;有丝分裂各个时期持续的时间(小时)：;蚕豆根尖细胞的细胞周期;2.1 染色体的复制和有丝分裂的准备 间期（表面上的平静）;在间期，染色体呈染色质状态，在光学显微镜下观察时，它们看上去似乎是静止的，但间期染色体正处于高度活跃的状态，为有丝分裂紧张的准备条件。 这期间要完成DNA的复制、有关DNA的转录及蛋白质的合成，并为细胞分裂积蓄能量。;2.2 有丝分裂（mitosis）的各个主要时期 在整个过程染色体会产生有规律的变化，包括两个紧密过程：核分裂为二,细胞质分裂，二个子细胞各含一个核。 根据核分裂的变化特征可以将有丝分裂分为四个时期：前期?? 中期?? 后期?? 末期。;;2.2.2 中期染色体排列于赤道板上；染色体高度螺旋化，适于进行细胞学研究;2.2.3 后期 后期是染色体活跃、迅速运动的时期，也是整个有丝分裂过程最短的时期。在这一时期中，姊妹染色单体分开并移向两极。当子染色体到达两极时，此期结束。染色体运动速度：0.2~5?m/min;2.2.4末期及细胞质分裂 染色体到达两极，子核形成，产生2个子细胞;3. 实验用具及材料： 实验用具: 显微镜、载玻片、盖玻片、指形管、酒精灯、镊子、解剖针、刀片、吸水纸、小标签、铅笔； 实验材料: 黑麦根尖。;4. 实验方法及步骤： 1）材料的准备和取材 种子浸泡于水中，种子吸胀后将种子捞出，放在垫有滤纸的培养皿中,置于25度条件下（温箱）发芽。待根长约1－1.5cm时此时大量细胞进行分裂时剪根(一般以上午10:30-11:30为宜)。;;;2）预处理： a：目的：获得较多的有丝分裂中期分裂相； 使染色体收缩变短. b：预处理方法： 化学方法：秋水仙素、8-羟基喹啉、?-溴萘等。 低温方法：小麦1-5度；水稻、玉米６-８度约 20-40小时。 剪取根尖放入盛有蒸馏水的指形管中，再置于冰水共存的冰瓶中，将冰瓶置0-3度冰箱处理24小时。染色体数目较多的材料可适当延长处理时间。;;;３）固定：要求采用一定浓度的渗透力强的固定液将植物的组织、细胞迅速杀死，使蛋白质沉淀并尽量保持其原有状态。 常用的固定液： Carnoy I: 冰醋酸：纯酒精＝1：3 时间：２４hr ;;;4）解离、染色: 酸解法、酶解法 染液：①洋红：醋酸洋红②Schiff