青霉素发酵培训材料2.docVIP

青 霉 素 发 酵 培 训 材 料 青霉素发酵工艺流程 补料罐配制 补料 补料罐无菌料液 米孢子制备 消毒 消毒 通气搅拌 移种 米孢子 种子罐无菌培养基 发酵罐无 菌培养基 成品发酵液 通气 搅拌培养 发酵罐配制 消毒 种子罐配制 接种 种子 二、工艺控制简介 米孢子制备工艺流程 砂土孢子 单菌落 斜面孢子 茄子瓶孢子 茄子瓶孢子 计数 小米培养基的调制 分 离 合瓶、封蜡 罗氏米孢子瓶 砂土孢子 单菌落 斜面孢子 茄子瓶孢子 茄子瓶孢子 计数 小米培养基的调制 分 离 合瓶、封蜡 罗氏米孢子瓶 1、菌种保藏的原理：是根据菌种的生理、生化特点，创造条件使菌的代谢活动处于不活波状态。保藏时先挑选优良菌种，最好选取它们的休眠体，然后创造一个最有利于休眠的环境条件（如低温、干燥、缺氧和缺乏营养物质等），以降低菌种代谢活动的速度，达到延长保存期的目的。 2、菌种保藏的方法： 斜面低温保藏法：从砂土管、安瓿管或其他藏物内取出少量菌种或制成悬浮液接入新鲜的斜面上，在一定温度下培养，生长成熟后，放置2-4℃冰箱内保存，保存期:1-3个月. 石蜡油封藏法：此方法适用于不能用石蜡油做碳源的菌种，且方法简单易行。在无菌条件下将灭菌后的石蜡油倒入成熟的菌种斜面上，用量至少高出斜面1厘米，使菌种与空气隔绝，然后直立保存在冰箱或低温干燥处，保存期：一年左右。 砂土管保藏法：是保存抗生素产生菌常用的方法。优点是效果好，操作简便，保存期可达一年以上。砂土管孢子制备分为砂土制备和接种抽干两步进行。将砂和土按比例混合均匀，分装于12*100毫升小试管内，灭菌后烘干，并作无菌试验后备用。将要培养保藏的菌种斜面孢子刮下，直接与砂土混合，或用无菌水洗下孢子，制成悬浮液接入砂土管内混合均匀，混合后放在盛有无氧化二磷或无水氯化钙的干燥器中抽干（一般抽4-6小时）。然后置于放有干燥剂的干燥器或广口瓶内，盖紧密封，于2-4℃冰箱或冰库内冷藏备用。 青霉素菌种的保存使用砂土管保存，每年4月份、9月份制备两次用于菌种的筛选和复壮。 冷冻干燥法：是目前常用的较理想的一种方法。此种方法菌种可以保存1-5年，最多可达15年之久，但制备工艺较复杂，且需备有真空干燥和冷藏的设备，另外还需要保护剂，费用较贵。 大（小）米之保藏法：将要保存的菌种制成孢子悬浮液，取适量加入已灭菌的大（小）米培养基中，敲散搅匀，铺成斜面状，在一定温度下培养，待孢子成熟后取出置冰箱保存，或抽真空至水份在10%以下，低温或室温保存。 我车间青霉素生产使用此方法，利用小米培养基接种孢子，成熟后置于2-4℃冰库保存，使用期限为20天；通常每年春节前制作一批干米作为备用米孢子。 低温冻结保藏法（低温保藏法）：将需要保藏的菌种（孢子或菌体）悬浮于10%的甘油或10%的二甲亚矾保护剂中，置于低温（一般为-20~-70℃）冻结。保存温度视菌种不同而异，其优点是存活力高，变异率低，使用方便。 液氮冰箱超低温保藏法（液氮保藏法）：其优点是存活率高，稳定性强，是长期保存菌种的好方法，但要具备液氮和超低温冷冻条件，因此也不易推广。 3、影响米孢子质量的因素：1）原材料质量；2）培养基温度和湿度；3）孢子龄和冷藏时间；4）孢子量；5）保藏方法的影响 4、菌种选育的目的：1）提高发酵单位和发酵指数；2）改进产品质量；3）去除多余的代谢产物、合成新抗生素；4）降低生产成本 发酵工艺 1、培养基： 定义：是供抗生素产生菌生长、繁殖、代谢和合成抗生素用的，按一定比例组成的营养物质和原料。（基础料培养基组成具有一定的局限性，要使发酵通过延长抗生素分泌期大幅度来提高发酵单位，还需要在发酵过程中进行代谢控制和中间补料，因此培养基的完整定义还需包括发酵代谢控制和有关的工艺控制措施。） 培养基的成分及其功用：成分包括碳源、氮源、无机盐类、微量元素、前体（包括生长素和促进剂）等几大类。培养基的成分和配比产生的影响：A对产生菌的生长发育、产抗高低有影响；B影响提炼工艺和产品质量。 A碳源：是构成菌体细胞和抗生素碳架及供给菌种生命活动所需能量的营养物质，它是抗生素发酵的主要原料之一。 功用：a是能量的主要来源；b合成菌体细胞中各种有机物；c合成某些抗生素的碳架；d代谢的中间体是某些物质合成的前体物质。 不同菌种的酶系统不同，所利用的碳源也不同：有的用淀粉作碳源适宜，有的利用葡萄糖或乳糖作碳源较适宜。青霉素发酵利用葡萄糖作碳源，头孢发酵利用豆油作碳源。青霉素发酵过程需要加入豆油起到消沫作用，因为青霉菌对豆油利用较慢，通常在糖类贫乏或接近用完时大量代谢，而且分解所放出的能量比糖多，需要供给充足的溶氧，如果溶解氧缺乏，容易造成脂肪酸的大量堆积，发酵罐表现为溶氧指标低，氨水加量大，影响菌丝的正常代谢，严重时导致菌丝自溶，发酵罐