小麦粉中硫脲的测定（BJS201602）.doc.doc

——PAGE \* MERGEFORMAT4— —PAGE \* MERGEFORMAT5—— 附件2 小麦粉中硫脲的测定 BJS201602 范围 本方法规定了小麦粉中硫脲含量的高效液相色谱测定方法。 本方法适用于小麦粉中硫脲含量的测定。 原理 试样经提取、过滤、浓缩后，采用配有二极管阵列检测器或紫外检测器的高效液相色谱仪检测，外标法定量；阳性样品需用质谱法进行定性确认。 试剂和材料 注：水为GB/T 6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1乙腈（CH3CN)：色谱纯。 3.1.2乙醇（C2H5OH）：分析纯。 3.1.3乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。 3.1.4甲酸（HCOOH）：色谱纯。 3.2 标准品 硫脲标准样品的分子式、相对分子量、CAS登录号见表1，纯度≥99%。 表1 硫脲标准样品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量 中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量硫脲Thiourea62-56-6CH4N2S76.123.3 标准溶液配制 3.3.1硫脲标准储备液：称取硫脲标准样品（3.2）0.1 g（精确至0.000 1 g），用水溶解，并转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，此溶液浓度为1 mg/mL。贮存于4℃冰箱中，有效期3个月。 3.3.2硫脲标准系列工作液：分别准确吸取不同体积的标准储备液（3.3.1），用水将其稀释成硫脲含量分别为0.0 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL的标准系列工作液。临用时配制。 3.4乙酸铵水溶液（25 mmol/L，含0.15%甲酸）：称取1.925 g乙酸铵（3.1.3），加水溶解，加1.5 mL甲酸（3.1.4），定容至1 000 mL，经微孔滤膜（3.5）过滤，待用。 3.5微孔滤膜：0.45 μm，有机相。 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 4.2 超声波清洗器。 4.3 涡旋混合仪。 4.4 分析天平：感量分别为0.01 g和0.000 1 g。 4.5 旋转蒸发仪。 4.6 离心机：转速≥8 000 r/min。 分析步骤 5.1 试样制备 准确称取2 g试样（精确至0.01 g）于25 mL具塞刻度试管中，加入5 mL水涡旋混匀，超声5 min，加入乙醇（3.1.2）20 mL，混匀，超声20 min后，用乙醇定容至刻度，滤纸过滤（如样品浑浊或过滤较慢时，8 000 r/min离心5 min），取上层清液10 mL，旋转蒸发至干，用2 mL流动相（5.2.2）溶液复溶，再经微孔滤膜（3.5）过滤，滤液进液相色谱仪分析。 5.2 仪器参考条件 5.2.1色谱柱：HILIC柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm，或性能相当者。 5.2.2流动相：乙腈（3.1.1）+水，（90+10，v/v）。 5.2.3流速：1.0 mL/min。 5.2.4柱温：25℃。 5.2.5检测波长：246 nm。 5.2.6进样量：5 μL。 5.3 标准曲线的制作 将标准系列工作液（3.3.2）分别按液相色谱参考条件（5.2）进行测定，得到相应的硫脲标准溶液的色谱峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 5.4 试样溶液的测定 将试样溶液（5.1）按液相色谱参考条件（5.2）进行测定，得到相应的样品溶液硫脲的色谱峰面积，根据标准曲线得到待测液中硫脲的浓度，平行测定次数不少于两次。 硫脲的标准液相色谱图参见附录A的图A.1。 5.5 定性确认 如果试样中的色谱峰保留时间与标准品一致，则可初步确认试样中存在被测物质硫脲，阳性试样需用质谱法进行确认试验。 5.5.1 色谱条件 a）色谱柱：HILIC Silica色谱柱，100 mm×2.1 mm（i.d.），3 μm，或性能相当者。 b）流动相：流动相A：乙腈（3.1.1），流动相B：乙酸铵水溶液（3.4），梯度洗脱条件见表2。 表2梯度洗脱条件 时间（min）A相/ %B相/ %0955595510604010.595515955 c）流速：0.2 mL/min。 d）进样量：5 μL。 e）柱温：25℃。 5.5.2 质谱条件 a）电离方式：电喷雾正离子模式。 b）检测方式：多反应检测（MRM）。 c）雾化气压力：275.8 kPa。 d）干燥气温度：340℃。 e）干燥气流速：10 L/min。 f）定性离子对、定量离子、碎裂电压和碰撞能量见表3。 表3 硫脲的定性离子对、定量离子、碎裂电压和碰撞能量 中文名称母离子 (m/z)子离子