微生物肠杆菌的科综合实验报告.doc

河北联合大学 临床微生物学和微生物学检验学 Clinical Microbiology Microbiological Diagnosis 肠 道 杆 菌 实 验 论 文 班级：检验一班 实验日期：2013-09-24~30 实验组：第二组 指导老师： 综合实验报告 专业班级： 医学检验 时间：2013年 9月 24日～9月30日 实验名称 肠道杆菌 指导教师 熊亚南 一、预习报告 1. 实验目的 1.1掌握肠道条件致病菌与肠道致病菌的菌落特点。 1.2掌握肠道杆菌的主要生化反应。 1.3掌握肠道杆菌的分离鉴定方法。 1.4掌握粪便标本细菌学检测流程 2. 实验基本原理 肠道杆菌的细菌为革兰氏阴性菌，大多数有鞭毛，能运动。少数无鞭毛不能运动，不产生芽孢，需氧或兼性厌氧，在普通培养基上，一般都生长良好，均能发酵葡萄糖产酸或产气，触酶试验阳性，氧化酶试验阴性，还原硝酸盐。 这类细菌是人类和动物肠道中的细菌，有的引起腹泻、肠炎、肠热症和痢疾等。有的为条件致病菌，有时也可引起身体各个部位的感染。 革兰氏染色 3. 实验流程图 制作培养基 CB，SS，基础培养基，双糖铁发酵培养管 接种双糖铁培养基 接种鉴别培养基 血清学反应 药敏反应 主要仪器设备 高压灭菌锅 试管 锥形瓶 接种环 酒精灯 无菌玻片 显微镜、载玻片 镊子 二、实验报告 1.材料与方法 1.1材料 2号菌液 双糖铁培养基 CB培养基 SS培养基 基础培养基 青霉素 庆大霉素 氯霉素 复方新诺明 志贺氏诊断血清 沙门氏诊断血清 无菌生理盐水、结晶紫染液、卢戈碘液、95%乙醇溶液、稀释石碳酸复红染液、无水乙醇、松柏油 1.2方法 1.2.1标本分离 将菌种用平板划线法，分别接种于CB和SB培养基中，37℃温室培养24小时，进行菌落分离。 操做人： 1.2.2 鉴别实验 双糖铁实验 用接种针以无菌操作技术挑取可疑菌落，立即垂直插入培养基中心至接近管底处，再循原路退出到斜面上；接种针自斜面最低处向上划一直线（要求通过试管培养基的中心点），然后再从斜面低处向上轻轻来回作蜿蜒划线；接种完毕，盖好试管塞。贴上标签纸。37℃培养18~24小时，取出观察结果并分析 ，观察结果??? Gram stain实验 .1 涂片 于洁净无油的载玻片上,加无菌生理盐水一滴,按无菌操作法用接种环取待检标本少许，研入无菌盐水中，使成一个均匀、极薄菌膜，直径在1cm 左右。 .2干燥 使涂片自然干燥 .3固定 将玻片涂有菌膜的面向上迅速地往返通过火焰２－３次，以玻片触及皮肤，热而不烫为度。 .4初染 在制作的涂片上滴加结晶紫染液，1min后水洗，并将片上积水轻轻洒净 .5媒染 加卢戈碘液，1min后水洗，并将片上积水洒净 .6脱色 加95%乙醇溶液数滴于涂片上，频频摇3-5s后，斜持玻片，使乙醇溶液流去，再加乙醇溶液。如此反复２－３次，直至流下的乙醇溶液无色或稍呈淡紫色时为止（约30s）。水洗，轻轻洒去片上积水。 .7复染 以稀释石碳酸复红染液1min后，水洗，待干或用吸水纸印干，油镜检视。 血清学实验 取一块无菌玻片，平均分成两区，分别滴上志贺和沙门氏诊断血清，用接种环取在双糖铁培养基斜面上培养的可疑菌种分别与玻片上的两种血清混匀，注意每换一种血清时应用火焰灭菌再取菌落，以防交叉感染。混匀后等待实验结果并观察 操做人： 1.2.4 药敏实验 用灼烧过的接种环取可疑菌种，做来回划线，使之密密涂满于基础培养基表面。 将镊子经酒精灯灼烧后夹取含青霉素、庆大霉素、复方新诺明、氯霉素的纸片贴于含菌培养基表面并轻压，纸片应贴得均匀，纸片贴牢后避免移动。 37℃孵育24h，观察各消毒剂周围有无抑菌圈，比较各抑菌圈大小。 从平板背面用直尺测包括纸片直径在内的抑菌圈直径，记录结果。 操做人： 2.结果 2.1标本分离 CB培养基平板未变色，SS培养基在同一个平板上部分由原来红色变为黄色，则SS平板仍为红色培养基上的单个菌落为可疑菌落。 2.2 鉴别实验 2.2.1双糖铁试验结果 所有培养基均是斜面为红色，底层培养基生成黑色沉淀，斜面培养基与底层培养基有部分分离。则该菌种能分解葡萄糖产酸产气，不分解乳糖，并且能产黑色沉淀。如图2-1所示： 图1-1双糖铁培养基发酵试管 2．2.2血清学实验结果 通过实验，观察到在滴有沙门氏诊断血清中发生凝集反应，且志贺氏诊断血清没有变化。如图2-2所示： 图1-2血清学试验结果 2.2.3革兰氏染色结果 在显微镜下观察到可疑菌被染成红色，则该菌为革兰氏阴性菌。 2.3