组织病理切片的的制作过程.pdf

组织病理切片的制作过程 1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体 要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和 方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术 ，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然， 无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下： (1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅 速固定，以保证原有的形态学结构。 (2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能 迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同 ，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱 水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压 而使组织、细胞变形。 (4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范 化取材。 (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往 往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 1 (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干 净后再放入固定液中。 (7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完 全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。 2．固定 (1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即 置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大 过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。 (2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部，或需要对 整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血 管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。 (3)蒸汽固定法：比较小而厚的标本，可采用锇酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片，则 应在血片未干燥前采用锇酸或甲醛蒸汽接触固定。 最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。 3．脱水透明标本经过固定和冲洗后，组织中含有较多的水分，必须将组织块内的水 分置换出来，这一过程叫做脱水。无论是用石蜡切片，还是用火棉胶切片，都必须除去组 织中所含水分，因含水组织与石蜡、火棉胶等包埋材料不相容，常用的脱水剂为一系列 不同浓度的乙醇。 脱水的步骤是：80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时，此过程可用脱水机自控完成 。 丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂，但因其脱水能力很强，对组织有剧烈收缩作 用，在制作科研、教学切片时一般不用该试剂。因乙醇、丙酮等不溶于石蜡，还要经过一 2 个能溶于石蜡的溶剂替代过程称为透明。常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、水杨酸甲 酯等。 4．浸蜡、包埋 (1)使石蜡浸入组织中，取代组织中含有的透明剂。 (2)包埋：将浸蜡后的组织置于融化的固体石蜡中，石蜡凝固后，组织即被包在其中， 称蜡块，此过程称为包埋。 5．切片和贴片 (1)修整蜡块：可视其组织的大小，在组织边缘约0.1～0.2cm处，切去余蜡部分，否则 易造成组织皱缩不平。 (2)准备好切片用具：切片刀、毛笔、眼科镊子（弯）、漂烘温控仪 (3)安装蜡块：将修好的蜡块安装在金属或木制持蜡器上。 (4)安装切片刀：将切片刀安装在切片机的刀台上，把刀台上的紧固螺丝旋紧，使切 片时不产生振动，能保持一定的切片厚度。 (5)切片的厚度：切片机的厚度调节器上刻有0～50μm或0～25μm，可任意选择其厚 度，石蜡切片的厚度一般在4～6μm。 (6)切片 (7)铺片：用眼科