TNFα对TP酶的调节及其对5FU前体药作用的影响.docVIP

　　TNFα对TP酶的调节及其对5FU前体药作用的影响 　　2结果 　　2.1TNFα对肿瘤细胞株TP酶表达的调节大肠癌细胞株Lovo，SCF7细胞株TP酶浓度为（30.1±1.4） μg/g，耐药株MCF7/ADR的TP酶蛋白浓度为（18.8±0.4） μg/g，低于非耐药株（Plt;0.01）. 当TNFα浓度为1000 kU/L时，原无TP酶表达的Lovo细胞TP酶蛋白表达水平升高到22.5 μg/g，减低TNFα浓度不能使Lovo细胞中TP酶浓度上升，增加浓度Lovo细胞大量死亡. MCF7细胞 应用 TNFα处理后，TP酶蛋白表达水平随着浓度的逐渐升高而增加，具有剂量依赖性. 差异具有统计学意义（Plt;0.01）. MCF/ADR细胞应用TNFα处理后，TP酶蛋白表达水平有所升高，但上升幅度不大，也表现出剂量依赖性（Plt;0.05）. 但未达到非耐药的MCF7细胞株的TP酶蛋白表达水平（表1）. 应用200 kU/L的TNFα处理MCF7细胞后随培养时间延长细胞TP酶蛋白表达呈上升趋势，在48 h达高峰，此后持续TP酶蛋白表达较高水平至96 h（仍为起始时的1.9倍）. 而MCF/ADR应用200 kU/L的TNFα处理后，TP酶有所上升，但幅度较小，未达到MCF7起始水平. Lovo 细胞在TNFα 200 kU/L作用72 h TP酶蛋白仍为0（表2）.表1TNFα对肿瘤细胞中TP酶的调节（略）表2200 kU/L TNFα 作用不同时间后乳腺癌细胞系中TP酶的变化（略） 　　2.25FU类药物的细胞毒作用 96 h 5FU和氟铁龙对Lovo和MCF7的生长抑制作用呈现明显的剂量依赖性（图1A）. 氟铁龙对Lovo和MCF7的IC50 (mg/L)高于5FU，为5FU的7.47～40.57倍，其差异有统计学意义［（31.65 ±1.14） vs (0.78±0.01)，(12.85±0.29) vs (1.72±0.03)，Plt;0.01）］. 两种药物对Lovo和MCF7的抑制作用呈时间依赖关系，低剂量的5FU在短时间内即产生生长抑制作用，氟铁龙起效时间较为缓慢（图1B）. 选择对肿瘤细胞生长无抑制作用的TNFα剂量（200 kU/L）培养肿瘤细胞24，48，72 h后，应用MTT检测MCF7细胞对5FU类药物的敏感性无提高（Pgt;0.05）. 但能提高MCF7对氟铁龙的敏感性. IC50在TNFα作用48 h最低（表3）.表3200 kU/L TNF作用时间与MCF7细胞对FU类药物敏感性的关系（略） 　　3讨论 　　大量资料证明，癌组织中的TP酶明显高于癌旁正常组织［2-3］. 且TP酶主要分布于肿瘤基质，尤其是肿瘤相关巨噬细胞，其次在肿瘤细胞. 我们发现： 大肠癌Lovo，SCF7（30.1±1.4） μg/g及其耐药株MCF/ADR（18.8±0.4） μg/g中均检测到TP酶，但耐药株TP酶浓度明显低于非耐药株，也进一步说明了不同肿瘤细胞之间TP酶表达水平存在明显的差异［5］. TNFα能上调肿瘤细胞MCF7，MCF/ADR中的TP酶，且表现出时间、剂量依赖性，其上调机制尚不十分清楚，TNF受体R2起了重要作用［6］. 5′dFUrd（氟铁龙）仅需要在肿瘤细胞中经TP酶的一步催化作用即可转化为有细胞毒作用的5FU. 本试验结果显示：氟铁龙对Lovo细胞的IC50为（31.6 ±1.1） mg/g，为5FU的40.57倍，起效时间较5FU缓慢，但是临床上确实有大量的结肠癌对氟铁龙 治疗 有效，由此提出，氟铁龙对大肠癌细胞的杀伤作用可能是通过间质细胞中的TP酶作用而实现的，Lovo细胞对氟铁龙不敏感的原因可能是由于Lovo细胞中无TP酶存在. 以上结果证明了TP酶在5FU前体药物转化过程中的重要性. 　　本结果还表明TNFα作用后的Lovo细胞对5FU和氟铁龙的敏感性并没有提高. 而TNFα 200 kU/L作用于MCF7细胞后，MCF7对氟铁龙的敏感性却有明显提高，而对5FU的化疗敏感性 影响 不大. 实验数据可以看出，TP酶活性提高1.27倍，MCF7对氟铁龙的敏感性提高了1.34倍. 我们也发现，TNFα增强氟铁龙的抗癌活性并不满意，上调后的IC50仍然高于直接应用5FU. 由于本实验是体外实验，推测应用于动物模型或人体后由于肿瘤间质细胞、肿瘤相关巨噬细胞中TP酶的作用，可能会进一步增加氟铁龙的敏感性. TNFα具有杀伤或抑制肿瘤细胞和多种免疫调节功能，但是由于副作用较大，为TNFα的临床应用造成困难. 如果将TNFα作为一种增效剂，小剂量应用，副作用将减少. 某些抗肿瘤药物与TNFα