不同产地的知母中芒果苷和多糖的含量测定.docVIP

　　不同产地的知母中芒果苷和多糖的含量测定 作者：关红晖 郭秋平 高英 姚小华 【摘要】 　　目的考察不同产地知母中芒果苷、多糖的含量。方法采用HPLC法测定不同产地知母中芒果苷的含量；采用硫酸蒽酮法测定不同产地知母中多糖的含量，色谱柱迪马C18柱 250 mm×4.6 mm。流动相为甲醇-3％醋酸溶液（45:55），流速为1.0 ml·min-1，柱温为室温。结果河北、安徽、广东知母中芒果苷的含量为0.50%～1.18％，回收率为101.54％，RSD为2.33%(n= 6)；芒果苷的线性范围为1.29～7.74 μg (r=0.999 5)；河北、安徽、广东知母中的多糖含量为0.52%～1.91%，回收率为99.15％，RSD为1.94%(n = 6)。结论各产地知母中芒果苷及多糖含量间变异较大；以河北知母中芒果苷最高，以广东知母多糖含量最高。 【关键词】 知母； 芒果苷； 多糖； 高效液相色谱 　　知母是百合科Liliaceae植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎,具有清热泻火、生津润燥的功效，用于 治疗 外感热病、高热烦渴、肺热燥咳、骨蒸潮热、内热消渴、肠燥便秘［1］。知母的主要有效成分为知母皂苷及多糖，具有免疫活性、抗菌活性,有抗氧化、抗糖尿病、抗肿瘤作用,对血脂质有抑制效应,有护肝、抗肥胖效应,在骨吸收方面有重要的抑制效应等［2］。知母虽为单一品种,但分布较广,各地产药材之间品质差异较大。本文采用了高效液相法及比色法检测比较了3个产地知母中芒果苷及多糖的含量,为更好地控制知母的质量提供了依据。 　 　1 仪器与材料 　　1.1 仪器岛津CBM-10A VP plus液相仪，岛津AUY120分析天平，RE－2000旋转蒸发器（上海亚生化仪器厂），HHS精密恒温水浴锅（江苏金坛市医疗仪器厂），unic uv-2100紫外分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）。 　　1.2 材料芒果苷对照品（购自 中国 药品生物制品检定所，批号110704200509）；香兰素（国药集团化学试剂有限公司，批；甲醇（色谱纯，德国Merck公司）；乙醇、氯仿、丙酮、高氯酸（分析纯，天津大茂化学试剂厂），不同产地的知母药材购自广州清平市场，经广州中医药大学中药鉴定教研室徐鸿华教授鉴定为百合科知母。 　　2 方法与结果 　　2.1 HPLC法测定各产地知母中芒果苷的含量 　　2.1.1 色谱条件色谱柱为迪马C18柱 250 mm×4.6 mm。流动相为甲醇－3％醋酸溶液（45∶55），流速为1.0 ml·min-1；柱温为室温。 　　2.1.2 溶液的制备 　　对照品溶液的制备：精密称取芒果苷4.3 mg于10 ml量瓶中，加甲醇溶解制成0.43 mg/ml的溶液。 　　供试品溶液的制备：分别称取河北安国、安徽、广东知母粉末（过3号筛）各2.00 g，于25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，超声30 min，放冷，用甲醇补足失重，摇匀，0.45 μm滤膜滤过。 　　2.1.3 线性关系考察分别精密吸取对照品溶液6.0，9.0，12.0，15.0，18.0 μl，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以芒果苷的含量为横坐标，色谱峰面积的 自然 对数为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝2E+06X＋3E+06 ，r=0.999 5。结果表明，芒果苷对照品在1.29～7.74 μg内呈良好的线性关系（见图1～2）。 　　2.1.4 精密度实验精密吸取对照品溶液15 μl，重复进样5次，测定峰面积平均值为16 567 992，RSD为1.59％，表明仪器精密度良好。 　　2.1.5 稳定性实验取广东知母溶液，分别于0, 24， 48 h测定，进样5μl，结果显示，0, 24，48 h 测定，广东知母中芒果苷的峰面积平均值8171278，RSD为2.72％，表明本品48 h内具有良好的稳定性。 　　2.1.6 重复性实验取同一批次的广东知母6份，分别独立按供试品溶液制备方法制成样品溶液，在上述色谱条件下测定，测得的平均含量为2.59 mg，RSD为2.82%。表明方法重复性良好。 　　2.1.7 准确度实验取本品粉末（过4号筛）0.50 g，精密称定一定量的对照品，按供试品溶液制备方法制成样品溶液，精密吸取5 μl，在上述色谱条件下测定6次， 计算 回收率。结果显示平均回收率为101.54％，RSD为为2.33%，表明芒果苷回收率良好。 　　图1 芒果苷对照品溶液HPLC图（略） 　　图2 河北知母药材溶液HPLC图（略） 　　2.1.8 样品含量测定取各个产地的知母药材3份，精密称定2.00 g，按供试品溶液制备的方法处理，在上述色谱条件下测定。结果见表1。结