中药天年饮对衰老大鼠卵巢端粒酶活性的影响.docVIP

　　中药天年饮对衰老大鼠卵巢端粒酶活性的影响 作者：谢红林 王陪 李皓岩 薛景凤 【摘要】 目的观察中药天年饮对衰老大鼠卵巢抗氧化能力和端粒酶活性的作用。方法D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老的大鼠模型，并给予天年饮灌胃。分别采用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法、PCR-ELISA法检测卵巢组织SOD活性、MDA含量和端粒酶活性。结果天年饮可明显提高衰老大鼠卵巢组织SOD和端粒酶活性，降低MDA含量，天年饮用药组与衰老模型组比较差异显著（P＜0.01或P＜0.05）。结论中药天年饮可提高衰老大鼠卵巢抗氧化能力和端粒酶活性，具有延缓卵巢细胞衰老的作用。 【关键词】 天年饮 衰老 端粒酶 抗氧化 卵巢 1988年MEites［1］提出，在衰老的过程中，神经-免疫-内分泌 网络 起着重要作用，而下丘脑-垂体-性腺轴（HPG轴）是其重要组成部分，研究HPG轴的衰老机制以及药物对其调节作用已成为目前抗衰老研究的热点。女性产生更年期症状的主要原因是卵巢功能减退，伴随生殖腺衰老所发生的性激素分泌及调节机制的改变不仅导致生殖功能的减退，同时也与衰老的各种表现有关［2］。端粒酶是肿瘤研究领域的热点，近年的研究表明，几乎所有的人肿瘤细胞中可检测到端粒酶活性，端粒酶的活性与癌的发生 发展 密切相关［3］。目前，在衰老及延缓衰老的研究中，端粒及端粒酶也逐渐受到重视。天年饮由刘河间《宣明论方》何首乌丸加味而成，能填精补髓、乌发延年。本课题组的研究已经发现，中药天年饮可提高衰老大鼠的免疫功能、延缓雄性大鼠性腺衰老［4，5］，本文观察了天年饮对衰老雌性大鼠卵巢SOD活性、端粒酶活性及MDA含量的影响，以期为进一步研究中药延缓卵巢功能衰退开辟另一途径。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 雌性SD大鼠，体重180～250 g。将大鼠随机分为4组，正常组、衰老模型组、天年饮用药组和阴性对照组，每组16只。其中模型组、用药组、阴性对照组大鼠均采用D-半乳糖连续腹腔注射（按200 mg/kg给药，1次/d，连续40 d）制作亚急性衰老的动物模型。模型组大鼠造模成功后不再做任何处理；用药组大鼠造模成功后每天用天年饮灌胃，共30 d；阴性对照组大鼠在造模成功后每天灌胃生理盐水，量及灌胃时间同用药组大鼠。 　　1.2 药品与试剂 天年饮由炙何首乌、怀牛膝、肉苁蓉、淫羊藿、丹参、茯苓等6味中药组成，熬制后每毫升含生药1.5 g，按16.2 g/kg灌胃给药。D-半乳糖(D-gal)，北京化学试剂公司(批号020402)；端粒酶活性检测试剂盒，德国Roche公司；超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）检测试剂盒，南京建成生物工程研究所。 　　1.3 端粒酶活性的检测 　　1.3.1 标本制备各组分别随机选取8只大鼠，断头处死，迅速取出双侧卵巢称重，生理盐水漂洗后，4℃，10 000 r/min离心1 min，弃上清液；将沉淀组织液氮冷冻后研磨，加入洗液洗涤，同上条件离心1 min；沉淀加入裂解液悬浮，冰浴30 min，4℃，13 000 r/min离心20 min，取上清液-70℃冰箱保存。 　　1.3.2 检测端粒酶活性采用德国Roche公司的端粒酶活性检测试剂盒（Telo TAGGG Telomerase PCR ELISA PLUS）,按试剂盒说明进行操作，包括端粒扩增、杂交及ELISA检测，分别于检测波长450 nm和 参考 波长690 nm处检测吸光度，并根据下面公式 计算 结果： 　　RTA=(AS-ASO)AS,IS(ATS8-ATS8,O)/ATS8,IS×100 　　 　　1.4 卵巢组织SOD活性、MDA含量的测定取各组余下的8只大鼠，断头处死，迅速取双侧卵巢，称重后加入生理盐水冰浴下匀浆，4℃、10 000 0 r/min离心10 min，取上清液-70℃冰箱保存。分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法按试剂盒说明进行操作，检测卵巢组织中的SOD活性和MDA含量。 　　1.5 统计处理 采用SPSS11.0统计软件，以方差分析进行统计处理。 　　2 结果 　　2.1 端粒酶活性 各组大鼠卵巢端粒酶活性见表1。衰老模型大鼠卵巢端粒酶活性明显低于正常大鼠（P＜0.01）；天年饮可抑制衰老大鼠卵巢端粒酶活性的降低，天年饮用药组大鼠端粒酶活性明显高于衰老模型组大鼠（P＜0.01）。 　　表1 各组大鼠卵巢端粒酶活性（略） 　　与模型组比较，*P＜0.01；与天年饮用药组比较，#P＜0.01；n=8 　　2.2 SOD活性和MDA含量 各组大鼠卵巢组织SOD活性和MDA含量见表2。 　　与正常大鼠比较，衰老模型大鼠卵巢SOD活性明显降低、MDA含量明显升高；中药天年饮可提高衰老大鼠卵巢SOD活性、降低MDA含量