源自真菌的同工酶对提高橙皮苷水解为橙皮素的生物转化.pdfVIP

实验结果表明黄姜皂素酸水解的一次废水赢接用于蒸煮醪及糖化醪的酸化剂，改善了 糖化醪的流动性，增加了醪液还原糖的含量约2％，调节糖化醪pH值为4．0—4。2进行 酒精发酵，使发酵液最终酒精浓度由原来的?。5％提高到8．5％一9％。该工艺在湖北长阳 酒精厂的生产中进行了应用，我们将湖北宣都顶立股份有限公司的黄姜皂素酸水解的 一次废水直接添加到蒸煮醪和糖化醪中，未影响原有的生产工艺，连续生产了两个月， 结果节约了酸化剂用量，发酵液最终酒精浓度的提高在1％以上，经质检部门检测，酒 精指标符合工业洒精国家标准GB394--93合格品要求，为废水的进一步治理提供薪的 经济来源。 作者楚介：龚美珍，通讯作者，电子邮箱：炉az_648@163。corn 源自真菌的同工酶对提高橙皮苷水解为橙皮素的生物转化 。 李咏梅桂文才李伟霞张 鑫朱 泽 (天津医科大学微生物学教研室天津300070) 和芸香糖组成，l爨究证实橙皮昔其抗炎、抗氧化、干扰肿瘤形成等多种生物活性，但 橙皮苷与其他苷类化合物一样，其生物利用度很低。药代动力学研究表明苷类成分肠 道志难以吸收、肠内滞留时间较长而易受到肠道菌群的水解作用。昔经肠道细麓代谢 后被水解，生成替元而发挥其药理作用。因此，通过将苷类化合物转化成其相应苷元 来提高替类仡合物生物利焉度的研究是近年研究热点。失此，瑞士雀巢研究中心采用 究所生化实验室采焉糖基化化学合成方法制成糖基化橙皮菅，均可提高了橙皮营的吸 收速度和效率，但这些方法的成本较昂贵，不适合低成本国际竞争的市场规律。因真 菌发酵被认为楚生物转化有效方法，敌本研究旨在探讨ATCC标准菌株 Sporobolomycessingularis具有用一葡萄糖苷酶同工酶活性及其水解橙皮苷能力，并 表达缝化多一葡萄糖苷酶圈工酶BglA蛋自，以期为多一葡萄糖营酶闻工酶在苷类化合 物生物转化中的应用及与阐明应用机制奠定实验基础。 方法：(1)以爱singularis接种在含高浓度橙皮菅制成的发酵培养基中，离效液 相色谱法(HPLC)方法检测培养液中橙皮苷及其苷元橙皮素含量变化，同时检测培养 液中Ssingularis生长情况。设立橙皮苷空白对照组及口一葡萄糖苷酶商品对照组。 将重组pOE30一Xa—bglA质粒转化入鼠coli S-300 酸铵沉淀、DEAESepharose和SephacrylHR柱层孛厅纯化从曼coli M15(pREP4) 糖昔为底物，在提纯过程中检测表达蛋自参～葡萄糖苷酶同工酶总活性及比活性，并 计算回收率。 结果：(1)在橙皮营空自对照缌中，随培养时间延长橙皮昔浓度笼变化；在曼 singularis发酵组中橙皮苷浓度随Ssingularis菌量增加而逐渐减少，在发酵的最 初48h内，大部分橙皮瞢由糖彗转化成苷冤，随着发酵时间的延长转化率逐渐降低， 发酵72h后培养基中橙皮苷的转化率约为79．5％，发酵终产物中橙皮苷以橙皮素形式 存在，旦橙皮营被水解情况与多一糠萄糖苷酶标准品对照组之间筋差别无统计学意义 (P0．05)。说明橙皮苷是由S singularis分泌的届一葡萄糖苷酶将橙皮苷Efj糖苷 水解为替元，而替元眈糖替具有更强的活性。(2)成功组建表达载体pQE30一x扩蛞至盈 coli coli 且在E M15(pREP4)中成功表达，从E 工酶总活性为16．2U，比活性为5．8U／mg，纯度提高了约19．3倍，回收率为7．5％。 结论：本研究证实Ssingularis具有嫠一葡萄糖营酶同工酶活性，能够将橙皮昔 bglA基 水解为其营元，转化后橙皮素浓度明显增加；通过克隆表达曼singularis 生物转化橙皮苷的机制是其坛』月基因表达的p一葡萄糖苷酶同工酶活性。因此本研究 认为蜃一葡萄糖苷酶餍工酶可用于蕾类化合物生物转化，使用此方法可以提高替类化 合物生物利用度，进而提高其药效。 作者篱氽：李咏梅，讲帮，主要