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PAGE  PAGE 6 ★★★★★ 通过固定化根霉属delemar脂肪酶连续生产 含有r-亚麻酸和辛酸的异构脂 Yuji Shimada,Masaharu suenaga,Akio Sugihara, Seiichi Nakai,and Yoshio Tominag 噢萨卡综合技术研究学院，噢萨卡536-8553，日本，与雅士龙有限公司，噢萨卡550-0014，日本 摘要： 以特定的1，3－根霉属delemar脂肪酶作为催化剂，连续酸解含有辛酸的琉璃苣油，混合物的水溶液，以此来激活固定在陶瓷载体上的脂肪酸。反应混合物中的部分甘三酯衍生物表明，水解伴随着酸解同时发生。通过添加不额外加水的琉璃苣油/辛酸底层混合物可完全抑制部分甘三酯的伴随水解。在30℃下，以4.5ml/h的流速向装油8g固定酶载体的柱子注入琉璃苣油/辛酸底层混合物时，与甘三酯化合的辛酸含量是50到55mol%。当通入60d后，酸解活性逐渐降低，100d后，甘油酯中的辛酸含量降到原来的73％，但把流速减到3.1ml/h时，辛酸含量又会恢复到原来的水平。运用分子蒸馏技术反应混合物中分离酯交换油，但在蒸出物中没有发现甘油酯，回收酯交换油作为残留物（酸价2.6）。通过对酯交换油特定部位的分析表明，仅仅是琉璃苣油1，3－位置的脂肪酸被置换成了辛酸。另外，通过高效液相色谱分析发现，所有的甘油酯都含有一个或两个辛酸，而且也有含两个r-亚麻酸和一个辛酸的甘油酯。因此，脂肪酶对r-亚麻酸的作用力很弱。 关键词： 酸解，连续琉璃苣油，辛酸式反应，固定化酶，r-亚麻酸，脂肪酸，packed-bed反应器，根霉属delemar,异构酶 花生四烯酸，一种n-6多不饱和脂肪酸，作为与花生四烯酸cascade有关的一种地方性荷尔蒙的前体是很重要的。ｒ－亚麻酸,花生四烯酸的前体也具有调节免疫和炎症反应的生理功效。并且含有r-亚麻酸的琉璃苣油和夜报春花油可被用作化妆品、功能性食品和婴儿套餐的组成成分。 易被因为在1，3－位置上含有中等长度碳链脂肪酸的异构酯能被粘膜细胞迅速吸收，所以一种可以生产含有功能性脂肪酸脂类的有效方法。以前我们曾报道过一用于种生产含有recosahexaenoic酸的异构脂的方法：在固定化根酶属delemar脂肪酶的催化下，用辛酸置换金枪鱼油1，3位上的脂肪酸。这种固定化的根霉属delemar脂肪酶是专门食品加工的只作用甘油酯1，3位置的脂肪酶。运用同样的方法，也能有效的分别从红花油和亚麻籽油中提出含有亚油酸和r-亚麻酸的异构酯。这种方法脂肪酸是一种利用固定化酶催化的连续式反应，但在工业搅拌器的搅拌下，此酶很破坏。另外，不稳定的多不饱和不适宜长期（48h）反应。因此，我们尝试着用packed-bed反应器完成这一连续式反应。 我们曾报道过用固定化根霉属脂肪酶作为催化剂把琉璃苣油1，3位置的脂肪酸置换成辛酸。目前的论文是关于在装有固定化脂肪酶的柱子中通过连续式反应生产含有α-亚麻酸的异构酯的方法和利用分子蒸馏技术从反应混合物中提纯脂类。 原料及其方法 油和脂肪酸 琉璃苣油是Nippon综合化学工业有限公司给的赠品。辛酸和甘油三辛酸酯是yashiro有限公司的商品。 脂肪酸活性的分析 根据以前的描述，脂肪酸活性是通过用50mmol/L KOH滴定从橄榄油释放出的脂肪酸来测定的。在30℃下反应30min，搅拌速度为50rpm。脂肪酸的单位活性定义为每分钟释放1umol脂肪酸所需酶的总量。 固定化酶的准备 根霉属delemar脂肪酶是TS公司给的赠品。正如我们以前的论文所描述的那样，先把50g陶瓷载体悬浮于200ml 10%的脂肪酶溶液中，边搅拌边缓缓加入冷的丙酮（－80℃），然后在真空中干燥沉淀物。 在packed-bed反应器中的连续式反应 先将8g固定化酶悬浮于50ml底层混合物中（琉璃苣油/辛酸＝1：2，w/w），然后在注入玻璃柱中（床式容器，1.5×6.2cm）。用水溶解150ml的底层混合物（含水量，1.18%）,以4.5ml/h的流速将此溶液加入柱子中，于30℃激活固定化酶，然后以同样的流速加入没有额外加水的50ml底层混合物，以此来抑制琉璃苣油酸解时伴随发生的水解。在同样的条件下完成连续式反应。 间歇式反应 根据其他地方描述的方法，反应式在螺帽覆盖的容器中进行的。利用以下反应方法激活固定化酶：将含油12g底层混合物（琉璃苣油/辛酸＝1：2，w/w）的反应混合物、12g水、0.48g固定化酶在30℃下培养48min，且以上每分钟振动140次。因为受激活的酶同时催化酸解和水解，所以酶的预处理应在12g新鲜的底层混合物中完成，不额外加水，其方法于酶的活化过程相同。重复两次预处理，就可以抑