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中肽生化技术系列 Stapled Peptides 杭州中肽有限公司 α-螺旋是蛋白二级结构最常见的一种，将其用于药物研发受到了大量关注。多肽的不稳定构象导 致易被酶水解以及生物利用率低，这些都可以通过α-螺旋结构构象的稳定化来解决。 Hydrocarbon stapled peptides是在特定位点引入化学交联的一种全烃化装订，将迷你蛋白锁定 在他们的生物活性的α-螺旋构象中。多肽装订的理念是用于克服两大类治疗试剂的靶向细胞内蛋 白相互作用的局限性：小分子和蛋白生物制剂。作为一类新兴的下一代药物，Stapled Peptide 应该具备易于合成和容易进入细胞的能力，以及能够多靶标识别的生物活性。 有两种构象化策略用于引入和稳定α-螺旋结构，即α双取代（甲基化螺旋骨架）和巨环桥形成（约 束构象）。在多肽内装订从而使两个合适的空隔合并：α-甲基化，α-alkenylglycine残基，有确 定的立体化学构象和烯烃链长度，然后在树脂上进行钌介导的烯烃复分解反应，从树脂上切割并 去保护后便可产生Stapled Peptide。下图显示了在多肽中产生稳定α-螺旋的三种不同的全烃装订 类型。α-甲基化和α-alkenylglycine用于每一种Stapled Peptide的生成，通常命名为XY，X表示 在烯基侧链中a-carbon的空间化学位置（Cahn-Ingold-Prelog命名），Y表示长度。在固相多肽 合成的过程中，α-甲基化，α-alkenylglycine交联氨基酸并入了合适的的位置。i， i+3 Stapled Peptide在i和i+3位置反别需要一单位的R5和S5. i，i+4 Stapled Peptide需要两单位的S5并入在 对应的i和i+4位置。i，i+7 Stapled Peptide在i位置需要一单位R8，i+7位置需要一单位S5。用 Grubbs I催化树脂连接多肽发生烯烃复分解反应，在2个非天然氨基酸之间发生交联，从而产生 固定α-螺旋构象的Stapled Peptide。 Click Chemistry合成Stapled Peptide “Click”反应（铜催化1,3-偶极环加成反应）高效且反应条件温和，加之必需非天然氨基酸容易 杭州中肽生化有限公司 杭州经济技术开发区 12 号街 69 号 ? ? Tel:?571 Email:?sales@? ? 合成使得single triazole-stapled peptides容易合成。例如，L-Nle(εN3) 和 D-Pra (D-? Propargylalanine)在i和i+4位置交联可用于产生single triazole-stapled peptides。 Stapled Peptide修饰 典型的Stapled Peptide修饰有两类：荧光标记和亲和标签。两种最常用的添加到Stapled Peptide N末端的基团是荧光素和生物素，荧光素用于研究细胞吸收和生物物理性质检测，生物素用于生 理性质和体外靶向作用评估。这些修饰通常需要一个弹性的分子间隔以分隔Stapled Peptide核 心和修饰基团。 N-乙酰化 交联点（β-丙氨酸，迷你-PEG 等） 荧光标记（FITC，5-FAM等） 装订在药物设计中的重要性： 引入烃装订可以产生高水平的α-螺旋，能增加5-5000倍的靶亲和力，保护其不被酶降解，提高细 胞渗透能力通过细胞内吞囊泡进入，延长体内半衰期，在培养细胞内特异性阻止蛋白蛋白相互作 用。 更好的靶亲和力 难被讲解，增加血清半衰期 通过内吞囊泡运输进入细胞 阻止蛋白蛋白相互作?? 无免疫原性 可行的药物动力和体内稳定性 有研究证明Stapled Peptide可