CD157在结核患者体内的表达水平、作用及其机制的初步探讨.pdfVIP

CD157在结核患者体内的表达水平、作用及其机制的初步探讨 摘要 目的： 1.检测健康人群、结核潜伏感染者、肺炎患者、肺结核患者外周血单个核细胞和 血浆中CD157水平，了解CD157在这些人群体内的表达情况。 2.利用体外细胞模型（结核分枝杆菌H37Ra感染人外周血的单核巨噬细胞系 THP-1、外周血单个核细胞）探讨CD157表达增高的作用及其相关机制。 方法： 1.利用qPCR检测各组人群外周血单个核细胞 （PBMC）中CD157mRNA 的表达 水平；利用ELISA检测血浆和配对胸水上清中游离CD157的蛋白水平；流式细 胞术分析CD157在不同细胞表面的表达情况。 2.收集结核性胸膜炎和非结核性胸膜炎患者胸腔积液，用ELISA检测上清中游离 CD157蛋白水平。 3.对部分活动性肺结核患者进行随访，检测其治疗前及治疗后3、6、12月外周 血PBMC 中CD157 的mRNA水平，以及血浆中游离CD157浓度的变化情况。 4. 利用结核分枝杆菌 （结核杆菌）H37Ra感染THP-1和PBMC细胞，检测细胞 中CD157 的表达情况。 5.检测结核性胸膜炎患者胸水中CD157和γ干扰素 （IFN-γ）表达情况，比较两者 相关性；用结核性胸膜炎患者和非结核性胸膜炎患者胸水培养THP-1细胞，加 入IFN-γ或中和IFN-γ抗体，检测其对CD157表达的影响。 6. 用CD157和结核杆菌作用于THP-1细胞，观察CD157对结核杆菌感染的巨 噬细胞分泌趋化因子的能力及其对细胞迁移的影响。 结果： 1.CD157在肺结核患者体内表达升高：（1）在PBMC 中，肺结核患者外周血单 个核细胞中CD157mRNA 的表达水平显著高于健康对照组、结核潜伏感染组和 肺炎患者组（P0.05）；流式结果显示，CD157主要表达于单核细胞以及中性 粒细胞表面，T细胞表面几乎不表达，但在肺结核患者体内表达CD157 的单核 1 细胞和中性粒细胞的比例与健康对照组相比并没有显著性差异；在血浆中，肺结 核患者血浆游离CD157浓度显著高于结核潜伏感染组、肺炎对照组和健康对照 组（P0.05）；而CD157mRNA在痰涂片阳性和痰涂片阴性的活动性肺结核患 者中的表达水平并没有显著性差异。 2.CD157的表达水平随着抗结核治疗降 ：检测治疗后3、6、12月活动性肺结 核患者的外周血中CD157 的mRNA水平，以及血浆中游离CD157浓度，结 显示，肺结核患者治疗后6个月和12个月外周血中CD157mRNA表达水平和血 浆中CD157浓度显著降低，相比治疗前差异具有统计学意义（P0.05）。 3.CD157在结核性胸膜炎患者胸水中表达增高：CD157mRNA和游离CD157在 结核性胸膜炎患者胸水中的表达水平显著高于其在外周血中的表达水平。结核性 胸膜炎患者胸水的游离CD157 的含量显著高于非结核性胸膜炎患者（P0.05）。 4.CD157可诱导结核杆菌感染的巨噬细胞分泌CCL2，进而促进细胞迁移：利 用CD157和结核杆菌共作用于THP-1细胞，结果显示THP-1细胞中CCL2 的表 达显著高于单独的CD157或者结核杆菌作用的细胞（P0.05）；进一步的细胞 迁移（Transwell）实验表明，CD157和结核杆菌共作用的THP-1细胞上清可以 显著提高细胞的迁移率，而在细胞上清中加入抗CCL2 的中和抗体，这种迁移作 用得到了显著的抑制，表明CD157是通过促进结核杆菌感染的巨噬细胞中CCL2 的表达来调节细胞的迁移。 5. 结核杆菌通过上调IFN-γ诱导CD157 的表达：结核杆菌H37Ra感染THP-1 和PBMC细胞的CD157mRNA或细胞培养上清中游离CD157表达量并不增高， 与对照相比，差异没有统计学意义（P＞0.05）。利用结核性胸膜炎患者和非结 核性胸膜炎患者胸水作用于THP-1细胞，结果发现结核性胸膜炎患者胸水作用 的THP-1细胞中，CD157mRNA 的相对表达水平以及游离CD157 的浓度都显著 高于非结核性胸膜炎患者胸水作用的细胞 （P0.05）。进一步，我们发现肺结核 患者中IFN-γ和CD157 的表达成正相关。因此我们利用功能性IFN-γ或者IFN-γ 中和抗体作用THP-1细胞，结果发现IFN-γ可以显著提高细胞中CD157 的表达 （P0.05）。 结论： 1.CD157在肺结核患者外周血中表达增高，其表达水平随着抗结核治疗逐步下