B7-H4蛋白、CA125蛋白在卵巢癌患者血清中的表达及其临床意义.pdfVIP

非小细胞肺癌研究时发现B7-H4 阳性患者发生淋巴结转移的机率比阴性患者大。 Krambeck[13] 等研究肾细胞癌时发现，B7-H4 阳性患者比阴性患者死于肾细胞癌进 展的机率要高三倍。Miyatake[14]等研究子宫内膜癌时也发现B7-H4在高危型子宫内 膜癌中过表达，且与肿瘤相关淋巴细胞浸润负相关，认为B7-H4 阳性可以作为子宫 内膜癌预后不良的指标。Bignotti[15] 等用寡核苷酸微阵列分析19例卵巢浆液乳头状 腺癌和15例高度纯化的卵巢癌上皮的14500个基因，发现B7-H4是其中一个过表达 基因。众多研究表明B7-H4蛋白与恶性肿瘤尤其是卵巢癌的发生发展关系密切，关 于B7-H4蛋白在卵巢癌中的高表达与临床病理因素和预后的关系仍然存在争议，因 此，B7-H4 蛋白在卵巢癌诊断与治疗中的价值成为研究热点。国内也已有报道 B7-H4蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义。 本研究通过免疫组织化学方法检测26例卵巢组织中的B7-H4蛋白，进一步检测 血清中B7-H4 、CA125两种蛋白的表达，并结合患者年龄、病理分期、组织学类型、 组织分级、腹水细胞学和淋巴转移等临床病理因素分析其在卵巢肿瘤中的表达及 其临床意义。 5 2. 材 料 和 方 法 2.1 研究对象 2.1.1 标本 收集2009年1月至2009年10月在蚌埠医学院附属医院妇产科和妇瘤科两个科 室手术的患者术前血液标本90例和相应卵巢组织存档蜡块标本26例。90例血清标 本中包括23例卵巢正常患者，包括子宫肌瘤、子宫腺肌症、功能失调性子宫出血 等； 35例卵巢良性病变患者包括卵巢子宫内膜异位囊肿、卵巢炎性包块、卵泡囊 肿、黄体囊肿、浆液性囊腺瘤、粘液性囊腺瘤、成熟性畸胎瘤、卵泡膜瘤等；32 例卵巢癌患者，包括浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌 等。26例卵巢组织蜡块标本均为手术切除组织经10%中性福尔马林固定常规石蜡包 埋标本，包括卵巢正常组织、卵巢良性病变组织、卵巢恶性病变组织。 2.1.2 病例纳入标准 ①研究对象均为首发病例，术前均未接受过任何药物治疗或放疗；②所用标 本均经同一病理专家阅片明确诊断；③所有血液采收均通过无菌静脉采血技术于 患者入院后未行任何治疗前采集空腹静脉血；④所有组织标本均取自相应病人； ⑤病历资料完整。 2.1.3 临床病理资料 诊断年龄：卵巢正常患者组年龄（20-64 ）岁，平均年龄(44.5士9.9)岁；卵巢 良性病变患者组年龄（17-74 ）岁，平均年龄(38.5士15.8)岁；卵巢癌患者组年龄 （14-75 ）岁，平均年龄(48.7士15.1)岁。组织学类型：浆液性癌22例，粘液性癌4 例，子宫内膜样癌1例，透明细胞样癌1例，非上皮样癌2例，未知病理类型2例。 临 床病理分期：根据术中探查和术后病理报告最终确定患者卵巢癌的手术病理分期， 采用FIGO2000年标准。32例卵巢癌FIGO分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期6例，Ⅲ期16例，Ⅳ 期3例。组织学分级：组织学分级:高分化(G1)8例；中分化(G2)10例；低分化(G3)14 例。术时有腹水20例，无腹水12例。术后经病理证实有淋巴结转移15例，无淋巴 结转移17例。 6 2.1.4 实验主要仪器 切片机，摊片、烤片机，隔水式电热恒温培养箱，微波炉， 显微镜，显微摄 影显微镜，超低温冰箱，4 ℃冰箱，37℃孵育箱，离心机，酶标仪，自动洗板机， 漩涡调拌器，EP管，精密度移液器（0.10，0.20，1.0ml），试管，一次性使用吸管， 吸水纸，微量滴定板摇动器，坐标板或方格纸，微量滴定板阅读器，小烧杯，玻 璃棒，量筒，恒温箱，微量振荡器，美国Abbott系列Axsym化学发光仪等。 2.1.5 主要试剂 鼠抗人B7-H4 单克隆抗体：美国eBioscience 公司产品， S-P 免疫组化试剂盒、DAB 显色液：北京博奥森生物制品公司产品， B7-H4 ELISA 试剂盒：美国RD 公司产品， CA125 化学发光试剂盒：上海天吴科技有限公司产品。 2.2 试验方法 2.2.1 免疫组织化学检测组织中B7-H4蛋白表达 （1） 切片： 1) 所有组织标本均为手术切除组织经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包