Tγδ1和Tγδ17细胞在结核分枝杆菌感染中的免疫作用.pdfVIP

Tγδ1 和 Tγδ17 细胞在结核分枝杆菌感染中的免疫作用∗ 中 文 摘 要 研究背景：全球目前有近三分之一的人口感染了结核分枝杆菌(Mtb)，其中 5~10% 可发展为结核病(TB)，而且 TB 仍是近年来世界上因感染单一病原体而 死亡的最重要病因之一。如何快速诊断出结核病是治疗结核、控制结核的重点项 目之一。检测结核杆菌感染的试剂盒(T-SPOT-TB)根据免疫应答及回忆反应的原 + 理，用 ESAT6/CFP10 刺激 CD4 T 细胞产生 IFN-γ，但这种试剂盒不能区分Mtb 隐匿性感染者(以下简称隐感者)与 TB 患者。近年已证实了 γδT 细胞在结核感染 中的免疫作用。γδT 细胞对 Mtb 抗原的刺激有增殖反应并产生 IFN-γ。与正常人 (HD ) TB γδT Mtb 或隐感者相比， 患者 细胞对 抗原刺激后的增殖反应降低，而 γδT 细胞产生 IFN-γ(Tγδ1 细胞)的能力有何不同尚不清楚。已报道不同细胞因子 可诱导小鼠 γδT 细胞产生 IL-17(Tγδ17 细胞)。但诱导人 γδT 细胞产生 IL-17 的调控机制以及 Mtb 抗原的影响，也还有待探讨。 目的：检测 HD，TB 患者经分离外周血单个核细胞（ PBMC ）培养增殖后用 Mtb-HAg 刺激后 T 细胞亚群产生 IFN-γ 和 IL-17 的变化。观察不同细胞因子和 Mtb 抗原在诱导 γδT 细胞产生 IL-17 中的作用。以阐明隐感者和 TB 患者之间 γδT 细胞的天然和特异性免疫的差异，以及为 TB 患者不同病程期间的免疫功能 状态提供新的判定指标。 1. Mtb-Ag γδ T IFN-γ 1. Mtb-Ag γδ T IFN-γ 方法：11.. 流式细胞术检测 MMttbb--AAgg 刺激 γγδδTT 细胞产生IIFFNN--γγ 1.1 采集3例 HD 外周血，加入 Mtb-HAg 刺激培养 10h，14h，18h 后，再 Monensin 6h 加入莫能霉素（ ）继续培养 ，收集细胞，加入荧光标记单抗进行表 面分子和胞内染色，流式细胞仪检测产生 IFN-γ 的 T 细胞亚群比例。 1.2 采集隐感者和 TB 患者外周血，分别用磷酸化抗原 HDMAPP、Mtb-HAg Mtb-HAg (10K) 14h Monensin 6h 和 刺激培养 ，再加入莫能霉素（ ）继续培养 ， 收集细胞，加入荧光标记单抗进行表面分子和胞内染色，流式细胞仪检测产生 IFN-γ 的 T 细胞亚群比例。 ∗ 本论文研究受卫生部重大传染病科技重大专项课题（2012Z004）和国家自然科学 基金项目的资助 1 1.3收集 HD 和 TB 患者外周血分离 PBMC 经培养增殖 12 天后的细胞，用 或不用 Mtb-HAg 刺激培养 2h，再加入莫能霉素（ Monensin ）继续培养 4h， 收集细胞，加入荧光标记单抗进行表面分子和胞内染色，流式细胞仪检测 γδT 细 胞中产生 IFN-γ 和 IL-17 细胞的相对比例。 2.ELISPOT TB T IFN-γ IL-17 2.ELISPOT TB T IFN-γ IL-17 22..EELLIISSPPOOTT TTBB TT IIFFNN--γγ IILL--1177