β1整合素反义寡核苷酸联合顺铂对卵巢癌体外侵袭性的影响.pdfVIP

β1 整合素反义寡核苷酸联合顺铂对卵巢癌体外 侵袭性的影响 中文摘要 目的: 观察β1 整合素表达下调对卵巢癌细胞生长，侵袭及对化疗药物敏感性 的影响，研究β1 整合素反义寡核苷酸联合顺铂对卵巢癌细胞增殖与侵袭的作用， 探讨β1 整合素作为肿瘤基因治疗一个新的靶点的可行性。 方法：体外培养人卵巢癌 SKOV3 细胞，预实验 1.优化反义复合物，倒置荧 光显微镜筛选最佳转染效果组。2.不同浓度β1 整合素ASODN 转染SKOV3 细 胞， MTT 法确定最佳实验浓度。3.不同浓度DDP 作用细胞，MTT 法确定最佳 实验浓度。实验：取对数生长期 SKOV3 细胞，分组：细胞对照组(不行药物处 理) ，正义链组(转染β1 integrin SODN)，反义链组(转染β1 integrin ASODN) ，DDP 组(DDP 作用) ，反义链+ DDP 组(转染β1 integrin ASODN 24 小时后10mg/l DDP 作用24 小时) 。进行以下实验：1.倒置光学显微镜(100 ×)观察各组细胞形态学改 变；2.应用MTT 法检测各组细胞生长抑制率；3. Transwell 侵袭小室建立肿瘤细 胞侵袭模型(铺 Matrigel 基质胶) ，计算各组细胞穿膜数，评价侵袭能力改变；4. 逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测 β1 整合素mRNA 表达在各组间的差异。 实验：取对数生长期 SKOV3 细胞，分组：单纯化疗组(不行转染) ，正义链+化 疗组(转染β1 integrin SODN)，反义链+化疗组(转染β1 integrin ASODN) ，培养24 小时后，分别加入不同浓度的DDP 作用24 小时，MTT 法检测各组细胞生长抑 制率，Logit 法计算IC50 (半数抑制浓度) ，观察ASODN 对化疗药物敏感性的影 响。 结果：β1 integrin ASODN 和DDP 对SKOV3 细胞都具有一定程度的凋亡诱导 作用，取β1 integrin ASODN 单一治疗最适宜浓度为400nmol/l ， 细胞凋亡率达 (65.10 ±5.659)%，取DDP 最适宜浓度为10mg/l，细胞凋亡率为(39.20 ±4.1010% 。 β1 整合素反义寡核苷酸可以下调 β1 integrin mRNA 的表达，其水平下降到 (47.53±0.4)%，明显抑制卵巢癌细胞增殖，生长抑制率可达(50.60±2.26)%，可以 降低卵巢癌细胞侵袭能力，平均穿膜数降为(28.40±2.31)个/200 倍视野，与DDP 合用可以降低化疗药物的IC50 ，由(15.27±0.45) mg/l 降为(7.8±0.68)mg/l ，数据与 5 对照组相比，具明显差异性，统计学处理结果，P ＜0.05，对细胞形态改变明显 并促使其凋亡。β1 integrin ASODN 联合 DDP 治疗组对卵巢癌细胞抑制率达 (61.60±0.85)%，对β1 integrin mRNA 表达的抑制率为(32.29±3.17)%，细胞穿膜数 平均为(17.00±1.58)个/200 倍视野，与对照组、SODN 组、DDP 和ASODN 组相 比较，均具有显著差异(P＜0.05) 。 结论：β1 整合素反义寡核苷酸有效抑制了卵巢癌的细胞增殖，验证了β1 整 合素可以增强卵巢癌的恶性增殖能力。通过反义寡核苷酸下调 β1 integrin 的表 达，显著增强了卵巢癌对顺铂的敏感性，提示β1 integrin 高表达是卵巢癌对顺铂 不敏感的重要因素，抑制基因表达可以提高临床治疗效果。β1 integrin ASODN 可以明显降低卵巢癌的侵袭能力，效果强于传统化疗药顺铂，体外实验模拟了β1 整合素可以介导卵巢癌的浸润转移，为针对性的基因治疗提供可靠工具。反义寡 核苷酸经阳离子脂质体介导法可特异性封闭靶基因，具低毒性不易耐药等特点， 优于现有化疗药物，与后者合用可以减少后者用量从而减轻不可逆转的毒副作 用，且本身具有抗肿瘤功效，应用前景广阔。 关键词：β1 整合素；反义寡核苷酸；增殖；细胞侵袭；顺铂；化疗敏感