饮用水大肠杆菌繁殖速率影响因素分析.docVIP

项目编号 h大学生科研基金 项 目 申 请 书 项目名称 饮用水大肠杆菌繁殖速率影响因素分析 申 请 者 _______ 指导教师 _______ 所属学院 经济学院 _ 完成时间 2013年1月 __ 一、基本情况 申 请 人 基本情况 姓 名 学号 所属学院、专业、入学年份 15届年经济学院 项目名称 饮用水大肠杆菌繁殖速率影响因素分析 申请经费（元） 360.6元 开始时间 2012年 12 月 完成时间 2013年1 月 我们此课题的目的在于为我们的微生物领域奉献出一份绵薄之力，也为我们生活中的日常饮用习惯作出合适的推断和建议。现在生活中的人们只顾着生活的便捷程度和习惯举动，却忽略了很多重要的因素，如卫生安全等的因素，这是我们值得引起注意的。我们此次的课题研究将围绕饮用水中的大肠杆菌繁殖情况得出一系列的结论并公布给大家。我们此次课题研究的内容主要是在我们通识课程的基础上，针对我们了解的生活环境给予更深层次的探究。基于因地制宜，创新于着重研究大肠杆菌在饮用水中的再繁殖情况并联系到我们额实际生活。 二、项目的现有基础和研究现状 项目现有基础： 最近几年国际生在大肠杆菌检测方法方面所应用的新方法，包括酶活性方法及其多管发酵法/滤膜法/固相细胞计数和免疫检验等的联用以及生物分子电子技术。同时还分析了各种方法的特点及其灵敏度和检测速度等，指出了其可能存在的缺点，并对其应用的前景进行了展望。1989年，HARTMAN总结了一种葡萄糖苷酸酶在大肠杆菌中的广泛应用。2005年ABUKNESBA提出了酶方法和免疫检验串联方法2小时内检测低至10cells/ml的大肠杆菌。2000年，VAN POUCKE等研究出可以在3.5小时内用酶方法和固相细胞计数联用定量检测和计数大肠杆菌，包括代谢活跃但不能培养的细胞的方法。 研究现状： 近年来检测水质中总大肠菌群及埃希氏大肠杆菌的方法学研究进展按其作用原理可概括为3类。第1类是通过对培养基成份及培养条件的改进达到检测目的;第2类是用酶底物0NP G和MUG与细菌产生的半乳糖苷酶及葡萄糖苷酸酶起反应,根据色泽及荧光的显示以证实总大肠菌群及埃希氏大肠杆菌的存在;第3类是采用“聚合酶链反应——基因探针”方法,根据DNA分子杂交试验以检测水样中的总大肠菌群及埃希氏大肠杆菌。其中,酶学方法较敏感,色泽及荧光显示明确,操作方便,能较快获得结果,比其他2类方法具有较多优点。 科目名称 预算经费（元） 经费的用途及计算依据 备注 1 材料费 80元 包括玻璃瓶，发酵管，灭菌吸管等的材料费共计80元 2 资料费 3 试验及检测费 4 通讯费 40元 与校方获取联系及与学生家长的直接交流通讯费约40元 四、实施方案、技术关键和预期目标成果 实施方案 ： 由我们小组讨论确定在水中研究大肠杆菌繁殖情况的具体方法。 小组分派任务，上网找相应的资料，带至实验室并作为我们操作的具体流程和规范。 找到我们实验的场所，最佳场所为上海大学 以下使我们操作的具体流程： 1、 以无菌操作，将检样10ml被测液放于含有90ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。 2、 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。 3、 另取1ml 灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。 4、 根据食品卫生标准要求或对检污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。 5、 初发酵试验：将待检样品接种于月桂基硫盐胰蛋白胨发酵管内，接种量在1ml，每一稀释度接种3管，置36±1℃文箱内培养24±2h，观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h.记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。 6、平皿分离 （1）水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。 （2）将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基，37 oC培养24 h，根据菌落特征，挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色，进一步证实是否为大肠菌群。 7、 复发酵试验 用按种环从所有48h±2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于BG