核酸印迹与分.pptVIP

DNA序列测定 DNA Sequencing * DNA序列分析方法 双脱氧链终止法 利用2′，3 ′-双脱氧核苷酸掺入中， 终止化学反应 化学裂解法 利用化学试剂裂解修饰碱基终止聚合反应 * 戊 糖 （RNA） 1′ 2′ 3′ 4′ 5′ 核糖(ribose) （DNA） 脱氧核糖(deoxyribose) * DNA的序列测定 5′端 3′端 C G A * * 双脱氧链终止法 dA * * DNA自动测序 用不同荧光分子标记四种双脱氧核苷酸，然后进行Sanger测序反应，反应产物经电泳分离后，通过四种激光激发不同大小DNA片段上的荧光分子使之发射出四种不同波长荧光，检测器采集荧光信号，并依此确定DNA碱基的排列顺序。 * DNA序列自动分析 ddG 红 ddT ddA 绿 ddC 蓝 橙 毛细管电泳 荧光标记 DNA合成 测序结果展示 * DNA自动测序结果举例 * DNA序列分析可以揭示基因和基因组一级结构变化 通过DNA序列分析可以鉴定基因和基因组的变异 通过DNA序列测定分析人工重组的基因 通过DNA序列测定对定点突变进行确认 *  DNA芯片技术 DNA Chip Technologies * DNA芯片（DNA chip） 也称DNA微阵列(DNA microarray) 在固相支持物上有序固化寡核苷酸或DNA探针，与待测荧光标记样品进行杂交； 通过对杂交信号的检测、比较和分析，得出样品的遗传信息； 包括cDNA芯片和寡核苷酸微阵列 * 基因芯片工作流程 * DNA芯片技术 cDNA芯片 探针是cDNA片段，可以同任何具有同源序列的样品形成杂交体，同时定量监测大量基因的表达。 寡核苷酸芯片 基因特异的寡核苷酸片段为探针，对低丰度基因表达水平变化的检测具有高度灵敏性。 可进行高通量基因转录活性的分析 * DNA芯片技术的特点 快速、高效、敏感、平行化、自动化。 通过芯片技术筛选得到的表达信息还要用Northern blot或定量RT-PCR进行验证 DNA芯片技术的应用 肿瘤基因表达谱的差异研究； 基因多态性分析； 微生物筛选鉴定； 遗传病产前诊断等 * 蛋白质芯片和组织芯片 蛋白质芯片 蛋白质检测芯片 蛋白质功能芯片 组织芯片 是以形态学为基础进行高通量检测基因表达信息的芯片技术 * 蛋白质检测芯片 是将成千上万种蛋白质如抗原、抗体、受体或酶在固相载体表面高度密集排列构成探针蛋白点阵，然后依据蛋白质分子间或蛋白质与核酸间相互作用的原理与待测样品杂交，实现高通量的检测和分析。 * 蛋白质芯片技术优势 在蛋白质结构、功能和相互作用，以及 疾病发展过程中蛋白表达谱差异研究等方 面。 在临床医学研究中，利用蛋白质芯片技 术寻找新的肿瘤标记物，各种肿瘤标记物 的筛选，用于早期诊断和治疗效果的监测。 * 组织芯片 应用成百上千的处于自然或病理状态下的组织标本，同时研究一个或多个特定基因及其表达产物的技术。 将组织标本集成在一张固相载体上形成微缩组织切片，在组织切片上高通量获取基因的表达信息。 应用：肿瘤病理学（病因、诊断、肿瘤标记物筛选、治疗等） * 分子生物学技术 高 颖 gaoying822@ * 核酸印迹技术与分子杂交 Nucleic Acid Blotting and Molecular Hybridization * 核酸分子杂交 （nucleotide molecular hybridization） 以DNA的变性、复性为理论基础； 指具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过复性处理后，形成异源双链的过程。 * Southern印迹（Southern blot） 基本操作过程 待测DNA样品制备、基因探针标记； 待测DNA样品的电泳分离； 电泳分离的DNA经变性、转移、固定到合适的固相支持物； 特异性核酸探针与膜上DNA片段杂交，放射自显影或显色检测目的DNA的存在。 * Southern blot基本流程 电泳 转移 杂交，显影 酶切DNA样品上样 DNA印迹 重物 * Southern blot关键步骤 待测DNA样品的酶切消化 基因组DN