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* * （5）.通常，酶的天然底物在体内的浓度水平接近于它的Km值。 （6）. 对催化可逆反应的酶来说，可根据正逆反应的Km值，了解酶在细胞内的主要催化方向及其生理意义。 二、底物浓度对反应速度的影响 1. 单底物酶促反应动力学 * 中间复合物学说 E：enzyme；S：substrate；P：product 1903年，Henri以蔗糖酶研究底物与反应速率关系，与Wurtz提出酶底物中间络合物学说 E + S k1 k2 k3 ES E + P * D.Keilin(英)B.Chance(美) 分别获得关于酶-底物复合物存在的比较直接的证据 Chance： 植物（辣根）过氧化物酶（棕色-血红素） H2O2→H2O + O2 吸收管谱检测：底物（H2O2）+ 棕色酶→淡红色的酶-底物复合物→加入供氢体后，酶液变棕色酶 * 溶菌酶-底物复合物结晶X线衍射图 * [S] V Vmax 当底物浓度较低时 反应速度与底物浓度成正比；反应为一级反应。 * [S] V Vmax 随着底物浓度的增高 反应速度不再成正比例加速；反应 为混合级反应。 * [S] V Vmax 当底物浓度高达一定程度 反应速度不再增加，达最大速度；反应为零级反应。 * v Vmax[S] Km + [S] ＝ ── 1913年Michaelis和Menten提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程(Michaelis equation)。 [S]：底物浓度 V：不同[S]时的反应速度 Vmax：最大反应速度(maximum velocity) Ｋm：米氏常数(Michaelis constant) * 米氏方程的推导 前提: 中间复合物学说: E+S ES→E+P 反应方程式: 假设： 产物浓度很底时，忽略 E + P → EP * E + S k1 k2 k3 ES E + P Total enzyme：[Et] = [E] + [ES]， [E] = [Et] - [ES] ∵ [S][E] ∴[St] － [ES]≈[S] K1 [E] [S]＝K2 [ES] + K3 [ES]，即： K1 ([Et]－[ES]) [S]＝K2 [ES] + K3 [ES] ＝ ([Et]－[ES])[S] K2+K3 [ES] K1 整理得： K2+K3 ＝ Km K1 令： ＝ Km ([Et]－[ES])[S] [ES] 则： * [ES]＝─── [Et][S] Km + [S] 整理得: ∵ES分解为限速步骤， ∴v=K3 [ES] 即： K3[Et][S] Km + [S] v＝──── 当底物浓度↑，酶活性中心全部饱和，即[Et]＝[ES]， 反应达最大速度：Vmax＝K3[ES]＝K3[Et] Vmax[S] Km + [S] v＝──── * 米氏常数 ：Km 当： v = 1/2 Vmax [S] = Km (摩尔/升) K2+K3 ＝ Km K1 Vmax[S] Km + [S] v＝──── Vmax V [S] Km Vmax/2 * 米氏常数的意义 Km值等于反应速度达最大反应速度一半时的底物浓度，单位是浓度单位，是酶的特征常数，酶对一定的底物只有一个特定的Km: V/2 = V[S]/(Km+[S]) 则 Km = [S] Km越小酶对底物的亲和力越大，Km最小的底物为最适底物。 Km可用于判断反应的方向及代谢途径的限速步骤。 * 过氧化氢酶 己糖激酶 碳酸酐酶 胰凝乳蛋白酶 Β-半乳糖苷酶 苏氨酸脱水酶 * Km值可用来表示酶对底物的亲和力 K2+K3 ＝ Km ，当 K2 ＞＞ K3 时， K1 ＝ [E][S] K2 [ES] K1 Km ＝ ＝ Ks（解离常数） Km和酶与底物的亲和力成反比 E + S k1 k2 k3 ES E + P * 米氏常数的求法 v — [S] 作图法 * 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 Y=aX + b * * 食物消化;唾液淀粉酶 * 活化分子比一般分子高出的能量。 * 琥珀酸脱氢酶只催化产生延胡索酸,非顺丁烯二酸 * 酶的活性中心的构象与底物的结构（外形）正好互补，就像锁和钥匙一样是刚性匹配的，这里把酶的活性中心比作钥匙，底物比作锁。 .缺陷：酶促反应多数是可逆反应，S←→P，这就产生了一只钥匙开2把锁的情况。 * 当酶分子与底物分子接近时，酶蛋白受