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从嗜盐菌中提取类胡萝I、素 刘剐李清彪 (厦门大学化工系，厦门361005) 关键词嗜盐菌类胡萝h素延多～ 引 言 类胡萝h素是指碳氢化合物胡萝l素和它们的氧化衍生物叶黄素两大类色素的总称，它 广泛存在于高等植物Ⅲ、藻类Ⅲ和微生物f3捌中，现己从自然界中分离出大约600种不同的 类胡萝h素化合物”]。天然类胡萝h素由于色泽鲜艳及其具有的营养价值，正逐渐成为广泛 使用的食品和化妆品添加剂【7]。近年来用微生物(以丝状真菌和红酵母为主)发酵方法提取 天然类胡萝h素由于具有可实现大批量工业化的优点而引起人们的普遍关注。本文报道了从 嗜盐菌中提取类胡萝p素的研究结果，该嗜盐葑是一种可在高浓度的NaCI环境下成活的菌 种，它的嗜盐特性使其具有～个潜在的优势——可免除一般微生物培养过程中的灭菌环节． 从而可降低生产成本。 1材料和方法 1．1实验材料 1 1．【菌种Ha]ohacteriutehalobicu，盐杆菌属，盐生盐杆菌种．厦大生物系提供，40c保 存丁二斜面上。 I．j 6H20 2培养基固体斜面培养基：酵母膏0．2％，乳蛋白水解物0．25％，琼脂25．Mgc22 25％。 一级液体培养基： 3％， 3％，NaCI 酵母膏0．2％，乳蛋白水解物0．25％，MgCl：6巩0 25％。二级液体培养基：PEPTONE 0．1％，CaCI0．0267％， K2SOd0．2％，NaCI O．1％，MgS吼7H20 2 25％。 0．005％，NaCI 柠檬酸钠0．5％．KCl0．2％．FeS04 I．2实验方法 1．2l二级扩大培养方法斜面培养：在无菌操作条件下接种于斜面上，在恒温培养箱中380C 培养5天。液体一级培养：将斜面培养菌接种于三角烧瓶内，置于培养箱中，恒温380C下光 照通气培养。液体二级培养：配置9000ml二级培养基溶液，在10L发酵罐中接种，37℃光 照通气培养5天。之后5天进行光照厌氧培养。 I．2，2生长曲线的测定在二级培养期间每隔24h测定苗体浓度(OD值表示)，绘制生长曲线。 得到红紫色沉淀，用取蒸水洗涤后，用研磨器研磨得悬浮液，将其与上次离心得到的上清液 混合后离心，重复上述操作直至沉淀中有较深蓝色。其中上清液中含有红膜，呈现桔红色， 供卜一步提取：而沉淀可经过电泳，分子筛层析来进一步纯化制取菌紫质． 1 2．4类胡萝h素的提取在上清液中加入等体积比的石油醚．丙酮溶液进行萃取，萃取液在 70℃下进行旋转蒸发，将固体残渣用丙酮溶解．除去脂类，而后多次重复上述操作．得到红 色固体．真空干燥可得色素。 1．2．5分析测定方法(1)可见光光密度法：铡定菌体溶液在波长630hm下的光密度值(0D 值)。(2)里色反应：用多烯类化合物和类胡萝h素的特征反应对嗜盐菌色素进行定性鉴定。 (3)紫外可见吸收光谱法：用丙酮溶解嗜盐茵色素和口一胡萝h素标准品(Merk公司产品)， TlIII的oo值。(4)薄层层析法：用层析纯硅胶G， 采用紫外可见分光光度计测定其在350-4500 把嗜盐菌色素和口一胡萝b素标准品的丙酮溶液，分别在展开剂(I)石油醚：乙酸乙酯(3：I)和(2) 甲醇：乙酸乙酯(1：4)中单向展开。 2结果和讨论 2．1生长曲线 37C下液体二级光照培养嗜盐菌的生长曲线图如图1所示．由图可知，嗜盐菌是兼性厌 氧菌，在氧气充分的条件下，它以氧化磷酸化方式进行异氧型生长繁殖。当通氧培养时，菌 体星指数生长，并在120h左右达到最高值，外观上菌液呈深红色；在氧气缺乏的条件下，菌 体则通过合成大量紫膜来利用光能，通过光 驱动质子泵机来产生电化学势能以维持