尾加压素Ⅱ促进肾系膜细胞增殖的细胞内机制研究.docVIP

　　尾加压素Ⅱ促进肾系膜细胞增殖的细胞内机制研究 【摘要】 目的： 研究 尾加压素Ⅱ(UⅡ)对肾系膜细胞(GMC)增殖功能的 影响 以及细胞内信号转导机制。 方法 ：①采用［3H］_胸腺嘧啶(3H_TdR)掺入实验研究UⅡ对GMC增殖的影响。②加入不同的细胞内信号转导阻断剂，观察UⅡ作用的信号转导通路。结果：UⅡ以浓度［(10-9～10-7)mol/L］依赖的方式促进GMC　3H_TdR掺入，分别较对照组高86.9%、105.8%和134.2%(Plt;0.01)。UⅡ刺激 3H_TdR掺入的效应能够被L_钙通道阻断剂尼卡地平、钙调素激酶(CaM_PK)阻断剂C增殖，该效应与胞外Ca2+内流、CaM_PK以及PKC有关，并提示UⅡ可能在肾纤维化发生和 发展 过程中发挥着重要作用。 【关键词】 肾系膜细胞 增殖 尾加压素 信号转导 　　Mechanisms of Proliferation Effect of Urotensin Ⅱ on Glomerular Mesangial Cells of Rats 　　ZHANG Yong_gang，edical College, Shantou 515041, China；Department of internal medicine, The Second Affiliated Hospital, Shantou University Medical College, Shantou 515041, China；Institute of Cardiovascular Research, Peking University First Hospital, Beijing 100034, China) 　　［Abstract］Objective: To investigate the proliferation effect of urotensin Ⅱ(UⅡ)on glomerular mesangial cells (GMC)of rats，and to study the signal transduction pathined by the increase in 3H_thymidine(3H_TdR)incorporation into DNA. Different inhibitors ol/L］induced 3H_TdR incorporation in a concentration_dependent manner, ol/L groups, respectively, pared ol/L), protein kinase C(PKC)inhibitor H7(10-5mol/L)and CaM_PK inhibitor C proliferation, through Ca2+, PKC and CaM_PK signal transduction pathay play important roles in the development of renal fibrosis． 　　［Key C)上探讨UⅡ刺激细胞增殖的作用及其细胞内机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　SD大鼠由北京大学医学部实验动物部提供( 中国 )，大鼠UⅡ(纯度gt;99.5%)为Phoenix Pharm Inc产品(美国)。RPMI 1640培养基、钙通道阻断剂尼卡地平(NI)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂H7、钙调素激酶阻断剂APK)阻滞剂PD98059为Sigma公司(美国)产品，3H_胸腺嘧啶(3H_TdR)为Amersham　Pharmacia　Biotech公司(德国)产品，余为市售 分析 纯试剂。 　　1.2 方法 　　1.2.1 大鼠肾小球分离和GMC培养 见 参考 　　本 研究 在体外培养的GMC上，采用3H_TdR掺入法，发现UⅡ能够以浓度依赖的方式促进细胞3H_TdR掺入增加，促进细胞增殖。该作用能够分别被Ca2+通道阻断剂NI、钙调素激酶阻断剂_PK以及PKC都能够影响对GMC的促增殖效应。然而，PD98059不影响UⅡ的效应，提示受体酪氨酸激酶_MAPK细胞增殖途径可能不是UⅡ促GMC增殖的主要途径。UⅡ的病理、生理意义及其作用机制是近年的研究热点之一。我们在国内首先报道了UⅡ的促丝裂效应。在培养的血管平滑肌细胞上，发现UⅡ能够促进细胞增殖，该作用需通过Ca2+、PKC、CaM_PK以及MAPK来实现［13］。我们还发现UⅡ能够促进新生乳鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌，其增殖效应与细胞外Ca2+内流、CaM_PK以及PKC激活有关，而促胶原合成作用可能通过其它途径来实现［22］。在慢性缺血所致肺动脉高压右心肥大大