淀粉酶测定方法难以标准化原因探讨.docVIP

　　淀粉酶测定方法难以标准化原因探讨 作者：耿素敏　白忠荣　袁家驰 【摘要】 淀粉酶测定在许多疾病中起着至关重要的作用，尤其在急腹症的诊断、鉴别诊断中。但其测定方法很多，难以标准化，也给临床资料的交换带来困难。通过分析比较，国内外应用的淀粉酶测定方法、试剂和仪器情况，认为染料释放法中的另一类以染料和可溶性限定底物结合的方法，其底物分子结构明确，稳定性显著提高，其为动力学法，随着生化分析仪的普及，此方法已成为淀粉酶测定的主流。但我国地域广阔，人口众多， 经济 发展 很不平衡，有不少贫困地区，所以很难在短时间内普及动力学法。干化学法、湿化学法、比色法并存的现象还需持续一段时间。 　　【关键词】 淀粉酶；标准化；动力学法 　　 　　α-淀粉酶(ΑMS，EC3.2.2.1)的升高见于急性胰腺炎，流行性腮腺炎等疾病，急性胰腺炎时，血和尿中的a-淀粉酶(AMS)活性显著增高。其测定方法很多，尚难以标准化，由于测定原理和底物性质的不同，淀粉酶的测定方法已超过200种以上 [1] 。各实验室间α-淀粉酶测定值离散度较大，对室间和室内质评的开展极为不利，也给临床资料的交换和临床诊断带来困难，现分析如下。 　　 　　1 α-淀粉酶测定的价值 　　 　　-淀粉酶来源于多种器官：胰淀粉酶由胰腺产生并释放到肠道中，唾液淀粉酶由唾液腺合成并分泌到唾液中。血液中的淀粉酶由肾脏清除并经尿液排泄。因此，尿液淀粉酶活性上升反映了血清淀粉酶活性的升高。-淀粉酶是将淀粉降解为麦芽糖的水解酶类。急性胰腺炎发作患者在腹痛开始后的几小时内，血液淀粉酶活力升高，约12 h后达到峰值；并至少在5 d后活力回复至 参考 范围内。由于多种非胰腺疾病如腮腺炎、肾功能不全等也会引起 检测血清、尿液中 -淀粉酶的升高。其升高程度低于急性胰腺炎发作时。急性胰腺炎是一种急腹症，必须及时做出正确的诊断和鉴别诊断。1929年Elman等发现血清淀粉酶升高对诊断急性胰腺炎有价值，使诊断有了可靠的客观指标，淀粉酶的测定使成为急性胰腺炎最常用的比较准确的诊断方法，尿淀粉酶测定因标本易采集，而被作为急性胰腺炎首选的检查项目 [2] 。一般而言，尿淀粉酶活力较正常高出2倍以上才有意义，年龄性别对酶活力无影响，胸、腹水测定淀粉酶也常被临床上作为诊断依据。血液和尿液中的淀粉酶活性，并不一定成平行关系。一般认为血液中淀粉酶活性反应正确、敏感，但在急性胰腺炎时，血液淀粉酶上升为一过性，易造成误诊、漏诊、而相对尿液淀粉酶出现高值往往时间较长。血液和尿液同时测定对急性胰腺炎的诊断和鉴别诊断具重要的价值。 　　 　　2 方法学比较 　　 　　由于测定原理和底物性质的不同，淀粉酶的测定方法已超过200种以上。这些方法可归纳为二类：天然淀粉底物方法和(分子组成)确定底物方法。以天然淀粉为底物的测定方法，如淀粉分解法、糖化法和色素淀粉法等。由于天然淀粉分子结构的不确定，故不同植物来源的淀粉和不同批号的淀粉，其分子结构和化学性质不尽相同，因此难以达到方法学标准化，测定误差大。目前除碘·淀粉法外，这类方法已被淘汰。使用(分子组成)确定的淀粉酶底物和辅助酶与指示酶组成的淀粉酶测定系统，可以改进酶反应的化学计量关系，能更好地控制和保持酶水解条件的一致性。这些底物有小分子寡聚糖(含3～7个葡萄糖单位)和对·硝基苯酚·糖苷等。其中，麦芽戊糖和麦芽四糖是极好的淀粉酶底物，试剂稳定，水解产物确定，化学计量关系明确。目前市售试剂盒就有好几种，以寡聚糖为底物的淀粉酶测定系统 [1] 。常用的碘-淀粉比色法，方法虽简单，但重复性不好，酶反应线性差，测定范围窄，高单位时往往误差较大 [3] ，常困扰着临床的诊断与鉴别诊断，国内外专家在这方面做了大量的探讨 [4-6] 。碘量法中的碘比色法因底物难以标准化，反应不成零级反应等缺点而被认为不是理想方法，但因其简单、快速、灵敏和价廉而在国内应用较广。糖化法因受内源性GLU的干扰，荧光法需特殊仪器，染料稀释法中的染料淀粉需离心分离等缺点，均被认为不是理想方法。染料释放法中的另一类以染料与可溶性限定底物结合的方法，近年来得到不断的发展主要表现为人工合成的底物分子结构明确，稳定性显著提高 [7] ，这类方法变成了推荐方法，其方法为动力法，随着生化分析仪的普及，此方法得以实施，已成为目前α-淀粉酶测定方法的主流。由于多学科新技术在干化学领域相互渗透，结合干化学分析有了长足的发展，干化学法在临床生化检验中得以应用推广。该法具有简便、快速、试剂保存时间长、干扰因素少等优点，而成为急诊生化检验的又一新方法。干化学是指将液体检测样品直接加样到干燥试剂片上，以被测样品的水分作为溶剂所引起的特定的化学反应，从而进行化学分析的方法，是以酶法为基础的一类分析方法。就淀粉酶干片而言，其方法也来源于染