磁分离酶联免疫测定技术在甲状腺激素测定中的应用价值.docVIP

　　磁分离酶联免疫测定技术在甲状腺激素测定中的应用价值 【摘要】引进加拿大BiochemImmunosystems公司的磁分离酶联免疫技术(MAIA)做甲状腺激素测定，灵敏度可达1×10＝12g检测级。经一年的实验，本文认为MAIA是一种灵敏、快速、特异性强、重复性好、显色稳定的试验。本文用来自内蒙古各地的153名健康人做正常 参考 值测定，与上海和网外正常参考值比较，结果发现：内蒙地区男、女甲状腺激素水平与上海地区比较有显着差异，P＜0.01，促甲状腺激素(TSH)无差异。内蒙地区与国外正常参考值比较除总T3无差异外，Pgt;0.05，其余均有显著性差异，Plt;0.01。用上海地区正常参考值，判定328名患者甲状腺激素结果异常，而套用内蒙地区正常参考值，328名中只有161名甲状腺激素异常，167名结果正常。 本文又对可能影响MAIA试验的因素：高血脂、高血糖、高血红蛋白血清做了交互影响试验，结果：甘油三酯达3.23mmol/L时，对试验有影响，F=11.65，血清中血糖20mmol/L，血红蛋白达13g/L，对试验无影响。 【关键词】磁分离酶联免疫甲状腺激素 测定甲状腺激素的方法很多，如放射免疫，酶标免疫，但他们都有这样或那样的缺点和不足。如：使用同位素标记，具有放射危害，对环境污染，试剂含有致癌物质，试剂有效期短，不适合中小 医院 。磁分离酶联免疫技术(MAIA)是80年代中期瑞士史洛诺(Serono)诊断中心发明的一项高灵敏度的酶免技术，该技术中的“免疫磁性微粒”是医学生物学领域分离材料方面的一项重大科技成果，是对微量生物活性物质分离纯化的关键材料。它具有灵敏、快速、特异性强、重复性好、无放射致癌物质、试剂有效期长的优点。与放射免疫法比较，两法结果符合率达92．72％，呈高度相关，(r=0.974，Plt;0.0001)，用MAIA测甲状腺激素在自治区尚属首家，Biochemimmunosystems公司试剂盒中带有国外的正常参考值，他们又委托上海市第一人民医院做了国内的正常参考值，但在实验中，我们发现：(1)甲状腺激素水平与上述两地有很大差异，容易给临床医生造成误导。(2)血清中脂类高会影响试验结果。那么高糖、高血红蛋白血清是否也会影响试验结果呢?我们采用正交设计，对三种影响因素进行交互影响试验。本文意在对MAIA在甲状腺激素测定中的应用价值做一些探讨，使MAIA这一高新技术在内蒙地区得到推广。 1实验原理 待测抗原在匀相状态中与酶抗体和荧光素抗体结合，然后加入已预先标记了抗荧光素抗体的磁性微粒。(大量的1μm大小的磁性微粒在匀相状态接触面积大大高于酶标，放免中使用聚乙烯板、聚乙烯管)标本中的抗原与酶标抗体，荧光素抗体，抗荧光素抗体，磁性微粒形成聚合物。在磁场的作用下，聚合物被沉淀，未结合的物质被洗去。加入底物显桃红色后，在SEROZYME-I型磁分离酶联免疫内分泌定量测定仪上采用三波长同时检测(目的是消除干扰因素，拓展测量范围)，然后读取结果。 2材料和方法 2.1仪器 SEROZYME-I型磁分离酶联免疫内分泌定量测定仪，三波长，软件可储存标准曲线，自动拟合最佳曲线，自动 计算 并打印浓度值。磁分离器(专用试管架，底部为永久性磁板)，混匀器。 2.2试剂 加拿大Biochemimmunosystems公司进口T3、T4、FT3、TF4、TSH试剂盒，有效期六个月。 2.3调查对象 (1)来自全区各地健康体检者，经实验室检查，肝功、血脂、血糖、血常规、尿常规正常者。共153人，其中男性77人，女性76人，年龄18～70岁。清晨空腹抽血，分离血清，-18℃保存，分析前一次复融，充分摇匀使用。 (2)将正常人血清测TG、GUL、HB，分别记为A1、B1、C1水平。另用正常人血清配高TG、GUL、HB，分别记为A2、B2、C2水平。A2、TG：3.23mmol/L，B2、GUL：20mmol/L，C2、HB：13g/L。 (3)用甲状腺激素正常 参考 值，结合临床症状，B超诊断， 治疗 后结果观察等作为最终确诊，对328名患者作准确度评价。 2.4方法 (1)抗原、抗体反应，标本与反应试剂加入专用试管后，37℃保温，形成抗原抗体复合物。 (2)磁抗体分离，加入磁性抗体，使之与复合物结合。在磁场的作用下沉淀，并洗去未结合的物质。 (3)以单磷酸酚酞为基质，抗体、抗原复合物中的标记酶(ALP)，催化基质分解生成酚酞，在碱性环境中显桃红色，颜色的深浅与激素的量成正比(竞争法成反比)。 (4)比色定量将已显色的测定管在SEROZYME测定仪利用三波长比色原理，滤去不良因素，拓展比色范围， 计算 出测定管激素含量。 3讨论 磁分离酶联免疫测定技术(MAIA)是80年代中期瑞士史洛诺