祖师麻注射液的高效液相指纹图谱研究.docVIP

　　祖师麻注射液的高效液相指纹图谱研究 作者：刘妍，王胜利，毕慧敏，游富英，孙秀欣 【摘要】 　　目的建立祖师麻注射液HPLC指纹图谱，为中成药产品及生产工艺过程质量控制提供有效方法。方法色谱柱为 VP ODS C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，柱温为30℃，流速为1.0 ml/min，检测波长为326 nm，以乙腈和0.5%的醋酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。结果祖师麻注射液有8个共有峰，相似度gt;96%。结论该方法简便可靠，可有效用于祖师麻注射液生产过程中的质量控制和对产品的质量评价。 【关键词】 祖师麻注射液；高效液相色谱；指纹图谱 中药质量控制技术是中药 现代 化的关键技术之一，HPLC指纹图谱技术正在越来越多地应用于中药质量控制［1，2］。祖师麻为瑞香科(Thymelaeaceae)瑞香属植物黄瑞香(Daphne giraldii Nitsche)的根皮和茎皮，药理研究表明祖师麻具有较强的镇痛、抗炎、抑菌等药理活性，在临床上多用于风湿病痛的 治疗 ，疗效显著。祖师麻含有香豆素类、二萜类、木质素类、黄酮类、蒽醌类及甾醇类等化学成分，其中祖师麻甲素（7，8-二羟基香豆精）又称瑞香素，为生理活性成分［3］。目前主要是通过祖师麻甲素含量的测定确定祖师麻注射液的质量［4，5］，关于祖师麻注射液各种指纹图谱技术研究未见报道。本实验对祖师麻注射液进行了HPLC指纹图谱研究，为祖师麻注射液内在质量的评价提供依据。 　 　1 仪器与试剂 岛津LC-2010A高效液相色谱仪，色谱柱：VP ODS C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)。乙腈为色谱纯，水为双蒸水，对照品祖师麻甲素（批号：110900-200405），购于 中国 药品生物制剂鉴定所，其他试剂均为分析纯。 　 　2 方法与结果 　　2.1 对照品溶液的的制备精确称取4 mg祖师麻甲素对照品于10 ml的容量瓶中，加甲醇溶解并定容制成质量浓度为0.4 mg·ml-1的祖师麻甲素对照品溶液。 　　2.2 祖师麻注射液样品的来源和处理祖师麻注射液由山西万荣三九药业有限公司，批号分别为0710162， 0711171， 0801071，0801072 ，0801281， 0801311， 0802071，0804191， 0902083 ，0902103。取注射液样品适量，用0.45 μm微孔滤膜过滤，作为供试品直接进样。 　　2.3 色谱条件 　　色谱柱为VP ODS C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；体积流量1.0 ml·min-1 ；柱温30℃，检测波长326 nm；进样量10 μl；流动相为乙腈～0.5%醋酸水溶液梯度洗脱；条件见表1。表1 祖师麻注射液HPLC指纹图谱梯度洗脱表（略） 　　2.4 方法学考察 　　2.4.1 精密度实验 　　取同一批号（0801072）供试品在上述色谱条件和测定方法下，连续进样5次，结果表明5次测定图谱中8个共有峰保留时间的RSD为0.08％～1.50％ ，峰面积的RSD为0.51％～1.89％。指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一致，其相似度均大于99%，证明仪器精密度良好。 　　2.4.2 重复性实验 　　取同一批号（0902103）供试品5份，分别用0.45 μm的滤膜过滤测定，结果8个共有峰保留时间和峰面积的RSD分别为0.04％～1.35％和0.68％～1.85％，5个样品色谱图相似度大于99%，该方法重复性良好，稳定可靠。 　　2.4.3 稳定性实验 　　同一批号（0801071）供试品，分别在0，2，5，8，12，16 h进样检测，色谱图中8个共有峰保留时间和峰面积的RSD分别为0.27％～1.54％ 和0.48％～1.98％ ，6次分析所得色谱图相似度大于99%，证明样品在16 h内稳定。 　　2.5 指纹图谱的测定及相似度 计算 　　按照选定的色谱条件对10个批次的祖师麻注射液成品进行指纹图谱检测，记录色谱图并积分，图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版，截取0～45 min的色谱图，按平均值法生成对照图谱，进行相似度计算，确定得到8个共有峰，见图1。各共有峰的保留时间和峰面积见表2，相似度见表3。8个共有峰的峰面积之和占总峰面积的90%以上，保留时间的RSD为0.32％，相似度gt;96%，符合指纹图谱研究技术的要求。按表1梯度色谱条件对祖师麻甲素对照品溶液进行测定，由保留时间得到3号峰为祖师麻注射液中有效成分祖师麻甲素特征峰。 　 　3 讨论 　　3.1 流动相的选择本 　　实验先采用了等度洗脱，发现用强洗脱能力的流动相时，出峰时间很早，且峰不能很好的分开，再用弱洗脱能力的流动相时，出峰少，且出峰时间太迟，故采用梯度洗脱。分别使用