绿茶提取物及表没食子儿茶素没食子酸酯对免疫细胞的作用研究.docVIP

　　绿茶提取物及表没食子儿茶素没食子酸酯对免疫细胞的作用研究 作者：张凤，杨桂文，张福淼，赵静，崔英杰，安利国 【摘要】 　　目的研究绿茶提取物和表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对脾脏细胞增殖和巨噬细胞NO分泌的影响。方法采用MTT法检测脾脏细胞增殖变化，用Griess试剂法检测NO产量的变化。结果绿茶提取物和EGCG都能够促进脾脏细胞增殖，并能够协同conA刺激脾脏细胞的增殖；还能够抑制LPS激活的巨噬细胞RAethodsMTT assay ethod acrophage NO secretion. ResultsGreen tea extract and EGCG could promote spleen cell proliferation and be able to cooperate ulate spleen cell proliferation.They could also inhibit LPS-activated macrophages RAI 1640干粉（GIBCO）；小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；噻唑蓝（Sigma）； 青霉素、链霉素（北京鼎国生物技术 发展 中心）；ConA（Sigma）；LPS（Sigma）；DMR 显微镜（LEica）；MCO-17AC二氧化碳培养箱（SANYO；Model 550 酶标仪（BIO-RAD）。 　　红细胞裂解液：NH4 Cl 8.29 g，KHCO3 1 g，EDTANa 37.2 mg。将以上试剂溶解于800 ml三蒸水，充分搅拌溶解混匀后，用1N的盐酸调pH值至7.2～7.4，加水补足到1 000 ml。过滤除菌，4℃保存备用。 　　Griess试剂：A液：对氨基苯磺酰胺0.5 g，10％醋酸150 ml；B液：α－萘胺0.1 g，三蒸水20 ml，10％醋酸150 ml，冰箱中保存，使用前A液B液等体积混合。 　　 2 方法 　　2.1 MTT法测定小鼠脾脏细胞的增殖取实验小鼠，脱颈处死。无菌条件下取出脾脏，剪碎，200目尼龙网过滤。收集的细胞以无血清RPMI1640培养液洗涤两遍，收集后加红细胞裂解液，中止裂解后收集细胞，以无血清RPMI1640培养液洗涤两遍，重悬细胞于RPMI1640培养液中。调整脾脏细胞浓度为（2×106 cells / ml），置于96孔板中，绿茶提取物或EGCG作用48 h及绿茶提取物或EGCG与ConA（20 μg/ml）共作用48 h。实验终止前4 h每孔加MTT (5 mg/ml) 20 μl，离心，弃上清液中止反应，每孔加150 μl 二甲基亚砜，轻轻摇动30 min溶解紫色结晶，490 nm波长酶标仪比色。 　　SI=ConA刺激后A值/未加刺激A值 　　2.2 Griess’ S法测定巨噬细胞RATT法测定小鼠脾脏细胞的增殖 　　3.1.1 绿茶提取物对小鼠脾脏细胞增殖的影响MTT法检测绿茶提取物对小鼠脾脏细胞增殖的影响，结果表明它不仅能刺激脾脏细胞增殖，而且也能协同ConA刺激脾脏细胞的增殖。见图1～2。 　　3.1.2 EGCG对小鼠脾脏细胞增殖的影响MTT法检测EGCG对小鼠脾脏细胞增殖情况表明：EGCG体外也能够刺激脾脏细胞的增殖，并协同ConA刺激脾脏细胞增殖。见图3～4。 　　3.2 Griess’ S法测定巨噬细胞RAC, Hulston CJ, Cox HR, et al. Green tea extract ingestion, fat oxidation, and glucose tolerance in healthy humans［J］. Am J Clin Nutr，2008 ,87(3):778. 　　［5］ Oh CJ, Yang ES, Shin SC, Kim JH, et al. Effects of a Tetramethoxyhydroxyflavone p7F on the Expression of Inflammatory Mediators in LPS-treated Human Synovial Fibroblast and Macrophage Cells［J］. J Microbiol Biotechnol，2008 ,18(4):686. 　　［10］ Dong L, ,et al. The activation of macrophage and upregulation of CD40 costimulatory molecule in lipopolysaccharide-induced acute lung injury［J］. J Biomed Biotechnol，2008:852571.