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新生儿干血斑G6PD筛查检测及其室间质量保证 江剑辉 广州市新生儿筛查中心 一、干血斑荧光斑点测定法 1．原理  正常人：葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）的催化下生成6-磷酸葡萄糖酸（6PG），并产生还原型辅酶Ⅱ（NADPH）,此产物在特定波长紫外线光照射下可发荧光。 G6PD缺陷：因NADPH生成减少，则荧光减弱或不产生荧光。 氧化型谷胱甘肽（GSSG ）的应用：NADPH又参与红细胞氧化型谷胱甘肽（GSSG）转变为还原型谷胱甘肽（GSH）的反应，在反应液中加入GSSG，使NADPH被消耗并氧化成无荧光的氧化型辅酶Ⅱ(NADP)，使杂合子容易检出。 2.仪器和材料 1）仪器 ①ZF-1型（激发光波长254nm和 365nm）紫外线分析仪(上海顾村电光仪器厂)。 ②水浴箱或电热烘箱。 ③新华定性滤纸。 ④3mm打孔器(钳)。 2)标本：血纸片在室温下自然晾干，避免日照，尽快检测（或置4℃冰箱内1周内检测）。 4）试剂 3.实验操作步骤 用打孔器取直径3mm的血斑纸片于试管或酶标板中 加入反应混合液100ul 孵化：置37℃温箱中或电热烘箱30分钟， 用吸管取少量浸出液于滤纸上，立即用风筒（低挡凉风）吹干 将滤纸置紫外灯下观察荧光反应。 4.结果判断 (1)正常：孵化10分钟后出现荧光。 (2)轻度缺陷：孵化20分钟有荧光。