(三)选择培养法鉴定突变型与重组型.ppt

回复突变可能的排除 Lederbery和Tatum利用的双营养缺陷型菌株进行试验，已基本排除A或B品系发生回复突变产生原养型细菌的可能。 单基因回复突变的频率约为10-6； 双基因回复突变的频率则为10-12，频率很低。 但试验中产生原养型菌落产生的频率非常高，因此基本可以排除回复突变的可能。 互养作用及其排除 试验材料： A品系：A-B+ T1S(met-bio-thr+leu+T1S)； B品系：A+B- T1R(met+bio+thr-leu-T1R)。 试验方法： 将A、B品系混合接种在基本培养基表面； 短时间后喷T1杀死A品系，使其不能持续产生thr与leu供B品系持续生长。 结果与结论： 仍然出现原养型菌落。 从而表明互养并非原养型菌落出现的原因，而可能发生了遗传重组。 转化作用及其排除 把品系A的培养液经加热灭菌，加入到B品系的培养物中，未得到原养型菌落；表明原养型菌落可能不是由转化作用产生。 戴维斯(Davis, 1950)的U型管试验(结果没有得到原养型细菌)； 实验结论：细胞直接接触是原养型细菌产生的必要条件。 经过上述分析可以认为：在Lederbery和Tatum的试验中，发生了一种不同于转化的遗传重组方式，称之为接合。 接合现象的发现和证实 接合现象的发现和证实 Hayes(1952)研究表明： 大肠杆菌两种不同菌株(品系)接合过程中遗传物质的转移是单向的； 从而认为大肠杆菌存在两种类型品系：雌性与雄性分别作为接合过程中遗传物质的供体与受体。 接合(conjugation)： 遗传物质从供体(donor)转移到受体(receptor)的重组过程。 (二)、F因子及其在杂交中的行为 1. F因子： Hayes等进一步研究发现，大肠杆菌在接合中作供体的能力受细胞内一种致育因子(fertility factor, F因子; sex factor, 性因子)控制。 F因子的化学本质是DNA，可以自主状态存在于细胞质中或整合到细菌的染色体上。 F因子可以在细菌细胞间进行转移并传递遗传物质。 五、细菌遗传的实验研究方法 (一) 细胞计数(培养物细胞浓度) (二) 建立纯系的方法 (三) 选择培养法鉴定突变型与重组型 (四) 突变型与重组型的批量筛选方法 (一) 细胞计数(培养物细胞浓度) 培养物中微生物计数方法是微生物学的基本实验技术，其基本思路是： 对原培养物进行连续稀释； 进行平板涂抹培养； 由于每个细胞形成一个菌落，计数菌落数； 根据稀释倍数计算原培养物中的细胞浓度。 (二) 建立纯系的方法——纯培养 挑取由单个细胞繁殖而来的菌落进行培养就可以获得由一个细胞繁殖而来的纯系。 通常采用平板表面涂布法或划线法可以获得单菌落。这种方法获得的纯系，称为“菌种纯”。 有时采用显微操纵器进行菌丝尖端切割等方法从单个细胞直接培养建立纯系。采用这种方法获得的纯系称为“菌株纯”。 (三) 选择培养法鉴定突变型与重组型 (三) 选择培养法鉴定突变型与重组型 (三) 选择培养法鉴定突变型与重组型 营养缺陷型的筛选、鉴定： 选择培养法是根据菌株在基本培养基和营养培养基上的生长表现将菌株分为原养型和营养缺陷型。 培养基的类型：基本培养基（野生型或原养型）、营养培养基（突变型或营养缺陷型）、选择培养基（鉴定突变类型）和补充培养基（具体突变类型的确定）。 其它突变类型的筛选、鉴定： 对于其它的突变类型(如温度敏感型)，也可以通过培养条件的选择培养来筛选与鉴定。 (四) 突变型与重组型的批量筛选方法 为高效检测、分离混和群体中不同突变型，黎德伯格夫妇设计了影印培养法。 该方法原理与选择培养法一致，但是采用影印法将在完全培养基上单菌落同时接种到不同选择培养基上同时对所有菌落进行选择培养，鉴定效率大大提高。 注意： (1)最初的培养基必须是非选择性的，即各种突变型都能够在其上生长； (2)必须采用适当的方法如涂布或划线法，以使培养物菌落之间要分开。 影印培养法 细菌基因重组的方式 一个细菌细胞的DNA与另一个细菌细胞DNA的交换重组可以通过四种不同的方式进行： 转化 接合 性导 第二节 细菌的遗传分析 一、转化 二、接合 三、性导 一、转化(transformation) (一)、细菌转化实验 (二)、转化过程 (三)、共同转化与遗传图谱绘制 转化(transformation) 转化(transformation)是指某些细菌(或其他生物)能通过其细胞膜摄取周围供体(donor)的染色体片段，并将此外源DNA片段通过重组整合到自己染色体组的过程。 只有当整合的DNA片段产生新的表现型时，才能测知转化的发生。转化中接受供体遗传物质的称为受体(receptor) 。 大部分的转化工作是用肺炎双球菌(Str